老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠终板软骨分离自椎间盘终板软骨组织
；椎体终板是椎体在生长发育过程中，椎体上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈轻度凹陷


，即为骨性终板
。椎体终板的中央仍为一薄层透明软骨覆盖，并终生存在，即为软骨终板
，上下软骨终板与髓核和纤维环连接共同构成椎间盘。椎体终板构成了椎间盘的上下边界，位于椎体中心的松质骨和椎间盘之间。是由软骨下骨和厚度相当的覆盖其上的软骨组成

。主要作用是防止椎间盘髓核组织嵌入椎体，同时具有平衡分散应力的作用。成熟的终板软骨细胞多2-8个成群分布于软骨陷窝内，这些终板软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群
。电镜下，终板软骨细胞有突起和皱褶
，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体
。在组织切片中
，终板软骨细胞收缩为不规则形
，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙
。体外培养的终板软骨细胞对于研究其生理功能
、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠终板软骨采用胶原酶-联合消化并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠终板软骨经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每3-4天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠白细胞介素13(IL-13)检测试剂盒 ，英文名： IL-13 ELISA Kit

Phaseolus vulgaris agglinin (PHA) ELISA Kit 菜豆凝集素(PHA)检测试剂盒

MouseToll-likereceptor9,TLR-9ELISAkit 小鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanNeuroglobin,NGBELISAKit人脑红蛋白

铜蛋白电泳染色试剂盒10次

sRANKL大鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基

IL13重组人 IL13 / ALRH 蛋白 (Fc 标签) Protein

瘦素(LEP)重组蛋白 Recombinant Leptin (LEP)

SCGB3A1重组人 SCGB3A1 / HIN-1 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD97 Protein Human 重组人 CD97 蛋白

HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

瘦素(LEP)重组蛋白 Recombinant Leptin (LEP)

CD97 Protein Human 重组人 CD97 蛋白

IL13重组人 IL13 / ALRH 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

SCGB3A1重组人 SCGB3A1 / HIN-1 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠仙台病毒抗体(HVJ-Ab)检测试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)检测试剂盒

Humannon-neuronalenolase,NNEELISAKit 人非神经元性烯醇化酶(NNE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenHeatShockProtein70,Hsp-70检测试剂盒鸡热休克蛋白70(HSP-70)检测试剂盒规格
：96T/48T

载玻片细胞CDK3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseHeatShockProtein90,Hsp-90ELISAKit小鼠热休克蛋白90(HSP-90)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠终板软骨细胞小鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠黑色素细胞抗体(MCAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠甲状腺素(T4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T