實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠直腸平滑肌分離自直腸組織 ；直腸為大腸的未段 ，位於小骨盆內 。上端平第3骶椎處接續乙狀結腸 ，沿骶骨和尾骨的前麵下行 ，穿過盆膈 ，下端以門而終 。直腸上端的大小似結腸 ，其下端擴大成直腸壺腹 ，是糞便排出前的暫存部位 ，下端變細接管 。直腸在盆腔內的位置與骶椎腹麵關係密切 ，與骶椎有相同的曲度 。直腸周圍多脂肪 、無縱帶 ，位於膀胱和生殖器官的背側 。直腸平滑肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展 ，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形 、三角形或扇形 ，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合 ，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起 ，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時 ，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。直腸的動脈血供主要是來自腸係膜下動脈的直腸上動脈 ，來自髂內動脈的直腸中動脈和來自髂內動脈的直腸下動脈 。平滑肌收縮是胃腸蠕動中基本的運動方式 ；腸炎時由於平滑肌特殊肌動蛋白的增加導致了平滑肌層的增厚 。平滑肌肌動蛋白可能影響收縮力的產生 ，這進一步證明了炎症時的腸平滑肌細胞具有可塑性 。利用腸平滑肌細胞的培養 ，可以幫助了解收縮 、增殖和胃腸道結締組織對平滑肌細胞的反應 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠直腸平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠直腸平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠Slit同源物3(Slit3)檢測試劑盒  ，英文名 ： Slit3 ELISA Kit

Phenylalanine (LPA) ELISA Kit 人苯(LPA)檢測試劑盒

ChickenInsulin-likegrowthfactors1,IGF-1ELISAKit 雞胰島素樣生長因子1(IGF-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCCB(Mousecalciumchannelblockers)ELISAKit小鼠鈣通道阻滯劑

細菌DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20次

RatAndrostenedione,ASDELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

ACVR2B重組人 ACVR2B / ActivinR-IIB 蛋白 (Fc 標簽) Protein

角蛋白5(KRT5)重組蛋白 Recombinant Keratin 5 (KRT5)

HEXB重組人 Hexosaminidase B / HEXB 蛋白 Protein

CD97 Protein Human 重組人 CD97 蛋白 (Fc 標簽)

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

角蛋白5(KRT5)重組蛋白 Recombinant Keratin 5 (KRT5)

CD97 Protein Human 重組人 CD97 蛋白 (Fc 標簽)

ACVR2B重組人 ACVR2B / ActivinR-IIB 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

HEXB重組人 Hexosaminidase B / HEXB 蛋白 Protein

小鼠纖連蛋白(FN)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat osteoprotegerin ligand (OPGL) ELISA Kit 大鼠骨保護素配體(OPGL)檢測試劑盒

Humandopaminedecarboxylase,DDCELISAKit 人多巴胺脫羧酶(DDC)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenHeatShockProtein60,HSP-60檢測試劑盒雞熱休克蛋白60(Hsp-60)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞CDK2蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠直腸平滑肌細胞小鼠血管緊張素Ⅱ   英文名稱 ：   Angiotensin Ⅱ   規格 ：      英文縮寫 ：   ANGⅡ

小鼠血管生成素-2   英文名稱 ：   Angiopoietin-2   規格 ：      英文縮寫 ：   ANG 2

小鼠心素   英文名稱：   aialnaiureticpeptide   規格 ：      英文縮寫 ：   ANP

小鼠凋亡誘導因子   英文名稱 ：   apoptosis-inducing factor   規格 ：      英文縮寫 ：   AIF