老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次


，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

大鼠直肠黏膜上皮分离自直肠组织
；直肠为大肠的未段
，位于小骨盆内。上端平第3骶椎处接续乙状结肠

，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿过盆膈，下端以门而终。直肠上端的大小似结肠，其下端扩大成直肠壶腹，是粪便排出前的暂存部位
，下端变细接管
。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切，与骶椎有相同的曲度。直肠周围多脂肪、无纵带，位于膀胱和生殖器官的背侧
。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉，来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉
。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的道防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为先接触抗原的细胞
，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度

。

方法简介：

实验室分离的大鼠直肠黏膜上皮采用先机械分离法
、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠直肠黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息
：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性

：可传1-2代

消化液
：0.25%

培养条件
：气相：空气

，95%；CO2，5%

大鼠直肠黏膜上皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品

：

大鼠细胞间粘附分子5(ICAM5)检测试剂盒 
，英文名： ICAM5 ELISA Kit

Mouse growth hormone releasing peptide ghrelin (GHRP-Ghrelin) ELISA Kit 小鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)检测试剂盒

MouseTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit 小鼠组织因子途径抑制物(TFPI)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHsp-40(MouseHeatShockProtein40)ELISAKit小鼠热休克蛋白40

细胞MAPKAPKINASE2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-18大鼠白介素18

EFNA5重组大鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 Protein

H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2 0.5mgH5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2) H5N1流感病毒M2型(抗原)

SLAMF6重组人 SLAMF6 / Ly108 蛋白 Protein

FCER1A Protein Human 重组人 FcERI / FCER1A 蛋白

MAP2K1 Protein Mouse 重组小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 蛋白 (His & GST 标签)

H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2 0.5mgH5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2) H5N1流感病毒M2型(抗原)

FCER1A Protein Human 重组人 FcERI / FCER1A 蛋白

EFNA5重组大鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 Protein

MAP2K1 Protein Mouse 重组小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 蛋白 (His & GST 标签)

SLAMF6重组人 SLAMF6 / Ly108 蛋白 Protein

小鼠巯基转移酶(GST)检测试剂盒 96T/48T

Human retinol binding protein (RBP) ELISA Kit 人结合蛋白(RBP)检测试剂盒

HumansecretoryimmunoglobulinA,SIgAELISAKit 人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAi-smoothmuscleaibody,ASMA检测试剂盒人抗平滑肌抗体(ASMA)检测试剂盒规格：96T/48T

植物细胞周期S早期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒10次

HumanypsinELISAKit人(ypsin)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠直肠黏膜上皮细胞小鼠C-反应蛋白检测试剂盒   小鼠C-反应蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠C-反应蛋白试剂盒
，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠C-反应蛋白试剂盒
、小鼠C-反应蛋白eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
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小鼠CXC趋化因子受体检测试剂盒   小鼠CXC趋化因子受体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠CXC趋化因子受体试剂盒
，规格型号
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。

小鼠CXC趋化因子配体检测试剂盒   小鼠CXC趋化因子配体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠CXC趋化因子配体试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠CXC趋化因子配体试剂盒
、小鼠CXC趋化因子配体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
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小鼠c-fos检测试剂盒   小鼠c-fos试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠c-fos试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
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：小鼠c-fos试剂盒、小鼠c-foseisa试剂盒   保存条件
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