老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠小肠平滑肌分离自小肠组织；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通
，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内
，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、空肠和回肠三部分

。小肠内消化是至关重要的，因为食物经过小肠内胰液
、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后，基本上完成了消化过程
，同时营养物质被小肠粘膜吸收了
。小肠管壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞，粘膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层
，形成管状的肠腺，其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切；构成肠腺的细胞有柱状细胞、杯状细胞、潘氏细胞和未分化细胞。柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似，接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似
，绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短，不形成纹状缘。小肠有三种功能即消化
、吸收和分泌及运动功能，其中以吸收和分泌功能为主。平滑肌细胞的收缩是负责肠蠕动的动力，促使食物向下运动。小肠平滑肌细胞原代分离培养3天后
，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形
、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形
、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形
，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状
；密度高时
，则排列为旋涡状或栅栏状
。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点。小肠平滑肌肉瘤是起源于小肠壁肌层、黏膜下肌层和肠壁血管平滑肌的恶性肿瘤
，是小肠结缔组织恶性肿瘤中常见的一种。因此
，体外小肠平滑肌细胞的培养对研究小肠平滑肌肉瘤提供了基础和前提。此外，体外培养细胞，由于影响因素较为单一，是研究细胞功能以及相应的细胞信号转导机制的基础。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠小肠平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠小肠平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV

、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠褪黑素   英文名称：   Mouse Melatonin   规格：      英文缩写
：   MLT

小鼠金属硫蛋白   英文名称：   Mouse Metallothionein   规格
：      英文缩写
：   MET

小鼠尿微量白蛋白   英文名称：   Mouse Microalbunminuria   规格：      英文缩写：   MAU

小鼠黏膜选择素黏附分子1   英文名称：   Mouse Mucosal Vascular Addressin Cell Adhesion Molecule 1   规格
：      英文缩写
：   MADCAM-1

小鼠透明质酸(HA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human heparan sulfate (HS) ELISA Kit 人类肝素(HS)试剂盒

Humanformylmethionine,fMetELISAKit 人甲酰甲硫(fMet)试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickensolubleE-selectin,sE-selectin试剂盒鸡可溶性E选择素(sE-selectin)试剂盒规格
：96T/48T

载玻片细胞PDGF-B蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

Mouseferritin,FEELISAKit小鼠铁蛋白(FE)试剂盒规格：96T/48T

SOST重组大鼠 Sclerostin / SOST 蛋白 Protein

Hpt/HP(haptoglobin 0.5mgHpt/HP(haptoglobin) 结合珠蛋白/触珠蛋白抗原

YES1重组人 c-Yes / YES1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CFHR1 Protein Human 重组人 CFHR1 蛋白

MIF Protein Mouse 重组小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白

Hpt/HP(haptoglobin 0.5mgHpt/HP(haptoglobin) 结合珠蛋白/触珠蛋白抗原

CFHR1 Protein Human 重组人 CFHR1 蛋白

SOST重组大鼠 Sclerostin / SOST 蛋白 Protein

MIF Protein Mouse 重组小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白

YES1重组人 c-Yes / YES1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

大鼠小肠平滑肌细胞大鼠组酸丰富糖蛋白(HRG)试剂盒 ，英文名： HRG ELISA Kit

Nude mouse Clara cell protein (CC16) ELISA Kit 裸鼠克拉拉细胞蛋白(CC16)试剂盒

Mouseamyloidbetapeptide1-42,Aβ1-42ELISAKit 小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanLymeIgGELISAKit人莱姆IgG

土壤(lithium)酶连续循环反应比色法定量试剂盒20次

ELISAKitASMA大鼠抗平滑肌抗体

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。