實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃ ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠小腸血管內皮分離自小腸組織 ；小腸位於腹中 ，上端接幽門與胃相通 ，下端通過闌門與大腸相連 ，是食物消化吸收的主要場所 。小腸盤曲於腹腔內 ，上連胃幽門 ，下接盲腸 ，分為十二指腸 、空腸和回腸三部分 。小腸內消化是至關重要的 ，因為食物經過小腸內胰液 、膽汁和小腸液的化學性消化及小腸運動的機械性消化後，基本上完成了消化過程 ，同時營養物質被小腸粘膜吸收了 。小腸管壁由粘膜 、粘膜下層 、肌層和漿膜構成 。其結構特點是管壁有環形皺襞 ，粘膜有許多絨毛 ，絨毛根部的上皮下陷至固有層 ，形成管狀的腸腺 ，其開口位於絨毛根部之間 。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關係密切 ；構成腸腺的細胞有柱狀細胞 、杯狀細胞 、潘氏細胞和未分化細胞 。柱狀細胞和內分泌細胞與絨毛上皮相似 ，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似 ，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短 ，不形成紋狀緣 。小腸有三種功能即消化 、吸收和分泌及運動功能 ，其中以吸收和分泌功能為主 。平滑肌細胞的收縮是負責腸蠕動的動力 ，促使食物向下運動 。血管內皮細胞除了吞噬異物 、細菌 、壞死和衰老的組織等 ，還參與集體免疫活動 ，包括 ：①血管收縮及血管舒張 ，從而控製血壓 ；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解） ；③動脈硬化 ；④血管生成 ；⑤炎症及腫脹（浮腫） ；⑥內皮細胞亦控製一些物質 ，如白血球進出血管 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠小腸血管內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠小腸血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠單核細胞趨化蛋白1(MCP1)檢測試劑盒  ，英文名 ： MCP1 ELISA Kit

Podocin ELISA Kit 人Podocin 檢測試劑盒

Ratiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit 大鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforcTn-I(RabbitcardiacoponinI)ELISAKit兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ

細胞糖類總量鐵比色法定量檢測試劑盒20次

Ratepidermalgrowthfactorreceptor,EGFRELISAKit大鼠表皮生長因子受體(EGFR)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

MFI2重組小鼠 MFI2 / CD228 / melanotransferrin 蛋白 Protein

半乳糖凝集素3(GAL3)重組蛋白 Recombinant Galectin 3 (GAL3)

IL11重組人 IL11 / Interleukin 11 / IL-11 蛋白 Protein

CD44 Protein Human 重組人 CD44 蛋白

SIRPG Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 蛋白 (Fc 標簽)

AMPK Beta1 (AMP-activated Protein Kinase beta-1 0.5mgAMPK Beta1 (AMP-activated Protein Kinase beta-1) 腺苷單0酸活化蛋白激酶β1抗原

CD44 Protein Human 重組人 CD44 蛋白

FOLR1重組小鼠 FOLR1 / FR-alpha 蛋白 Protein

LILRA5 Protein Rat 重組大鼠 LILRA5 蛋白

FCGR2A重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His 標簽) Protein

小鼠血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cryoglobulin (CG) ELISA Kit 人冷球蛋白(CG)檢測試劑盒

Humanmethoexate,MTXELISAKit 人喋呤(MTX)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

BombyxmoriLivetin,LT檢測試劑盒家蠶卵黃蛋白(LT)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

A含量比色法定量檢測試劑盒20次

MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1,IGFBP-1ELISAKit小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

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