老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠肾动脉内皮分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物
、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质
，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子
、钾离子
、等，以调节水
、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能

，生成肾素、促红细胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官
。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。肾动脉的分支为叶间动脉，穿行于肾柱内
，上行至皮质与髓质交界处

，形成与肾表面平行的弓状动脉。小叶间动脉向被膜发出毛细血管，并向周围的肾小体发出入球小动脉，进入肾小囊后形成球形的毛细血管网
，再汇集成出球小动脉
，出肾小体
。直小动脉分支形成毛细血管网
，再汇合成直小静脉，入弓状静脉
、叶间静脉，最后汇合成肾静脉经肾门出肾
，注入下腔静脉
。肾动脉既是肾的营养血管，又是肾的机能血管
，与肾泌尿机能密切相关。肾动脉在肾实质内形成两个毛细血管网：肾小球毛细血管网，血压较高
，利于血浆滤过形成原尿
；球后毛细血管网，血压较低，利于肾小管的重吸收
。肾动脉内皮细胞是肾动脉的重要结构细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用
。肾动脉内皮细胞主要功能有：①在血浆滤过形成原尿的过程中起重要作用，②在肾小管的重吸收过程中起重要作用，③保持凝血和纤溶的动态平衡。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠肾动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肾动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠钙调素依赖性蛋白激酶2(CAMK2)检测试剂盒

，英文名
： CAMK2 ELISA Kit

Porcine gasin receptor (GsaR) ELISA Kit 猪促胃液素受体(GsaR)检测试剂盒

转基因植物PAT基因核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforMCP-3/CCL7ELISAKit大鼠单核细胞趋化蛋白3

体液腺苷酸环化酶(AdenylateCyclase)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitCBH猫汉赛巴通体

MMP8重组小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a 0.5mgAgtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a) 血管组织血管紧张素Ⅱ1型受体抗原

ERP27重组人 ERP27 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD300A Protein Human 重组人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白

EDA2R Protein Rat 重组大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白

Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a 0.5mgAgtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a) 血管组织血管紧张素Ⅱ1型受体抗原

CD300A Protein Human 重组人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白

MMP8重组小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

EDA2R Protein Rat 重组大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白

ERP27重组人 ERP27 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠血小板生成素(TPO)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat factor related apoptosis inducing ligand (FASL) ELISA Kit 大鼠凋亡相关因子配体(FASL)检测试剂盒

Humanα2-plasmininhititor,α2-PIELISAKit 人α2纤溶酶抑制物(α2-PI)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor(MousemammarycarcinomaMarker-CA153)ELISAKit小鼠癌标志物-CA153

饮料乙酸比色法定量检测试剂盒20次

Mouseierleukin8,IL-8ELISAKit小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠肾动脉内皮细胞小鼠载脂蛋白A1(apo-A1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠孕激素/孕(PROG)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠诱导型合成酶(iNOS)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠游离脂肪酸(FFA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装