老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠肾成纤维分离自肾组织
；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物
、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子
、等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能
，生成肾素、促红细胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等
，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官

。肾脏的这些功能
，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显

。成纤维细胞功能活动旺盛

，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。肾成纤维细胞是肾脏结缔组织中最重要的细胞类型，在体外培养中，一般大致成梭形
、多角形或不规则形等，为贴壁生长型细胞

。刚分离的肾成纤维细胞呈圆形
、折光性良好
，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀
，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长
，平坦
、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。其主要功能有：①组成过滤屏障内壁的重要部分
；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变
。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠肾成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肾成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠多药耐药蛋白1(ABCB1)检测试剂盒
，英文名： ABCB1 ELISA Kit

Porcine glucose anspoer 2 (GL2) ELISA Kit 猪葡萄糖转运蛋白2(GL2)检测试剂盒

动物源性成分(18S)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforLZM(RabbitLysozyme)ELISAKit兔

体液总胆汁酸酶循环比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitPF-4/CXCL4鸡血小板因子4

SPINK4重组小鼠 SPINK4 蛋白 (Fc 标签) Protein

酸脱氢酶0酸酶(PDP)重组蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase (PDP)

COMMD9重组人 COMMD9 蛋白 Protein

CD300A Protein Human 重组人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白

DDR2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

酸脱氢酶0酸酶(PDP)重组蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase (PDP)

CD300A Protein Human 重组人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白

SPINK4重组小鼠 SPINK4 蛋白 (Fc 标签) Protein

DDR2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

COMMD9重组人 COMMD9 蛋白 Protein

小鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human vacuolating cytotoxin associated protein A (VacA) ELISA Kit 人空泡毒素相关蛋白A(VacA)检测试剂盒

Humanα2-Aiplasmin,α2-APELISAKit 人α2抗纤溶酶(α2-AP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor(Mouseovariancancermarker-CA125)ELISAKit小鼠卵巢癌标志物CA125

饮料乙比色法定量检测试剂盒20次

MouseIerleukin9,IL-9ELISAKit小鼠白介素9(IL-9)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠肾成纤维细胞小鼠载脂蛋白E(Apo-E)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠网膜素(omein)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。