老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次


，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠神经少突胶质分离自脑皮层组织；大脑分左右两个半球
，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分

，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）、内侧面和底面（占2/3的面积）；半球表面有很多深浅不等的沟或裂
，沟或裂之间的隆起叫回

，它们大大增加了大脑的表面积；大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂、顶枕裂和中央沟
。由于三沟裂之界隔
，使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。少突胶质细胞分布于中枢神经系统
，在银浸染标本中，少突胶质细胞比星状胶质细胞小，其突起也较小而少
，呈珠状，故被称为少突胶质细胞或寡突胶质细胞。但是用特异性免疫细胞化学染色显示的少突胶质细胞，其突起并不少
，而且还有许多分支

。少突胶质细胞的主要功能是在中枢神经系统中包绕轴突、形成绝缘的髓鞘结构、协助生物电信号的跳跃式高效传递并维持和保护神经元的正常功能。其异常不仅会导致中枢神经系统脱髓鞘病变，还会引起神经元损伤或精神类疾病，甚至可以引发脑肿瘤。根据少突胶质细胞的分布和位置可分为三种
：①束间少突胶质细胞（interfasicular-oligodendrocyte），分布在中枢神经系统的白质的神经纤维束之间
；②神经细胞周少突胶质细胞（perineuronal-oligodendrocyte），分布在中枢神经系统的灰质区，常位于神经细胞周围，与神经细胞的关系密切，故又称为神经细胞周卫星细胞（perineuronal-satellite-cell），但在神经细胞胞体与此类细胞之间亦常有星形胶质细胞的薄片状突起分隔；③血管周少突胶质细胞（pcrivascular-oligodendrocyte），主要分布在中枢神经系统内的血管周围。少突胶质细胞形成的髓鞘膜是最为特化和复杂动物细胞膜之一
，其上有众多跨膜蛋白和表面蛋白用以维持髓鞘的致密稳定结构。如半乳糖脑苷脂（GC），它是髓鞘的一种主要类脂，用GC抗体鉴别成熟的少突胶质细胞是一种比较早的免疫鉴定方法
。近十年来
，神经发育学科进展较快，更多的少突胶质细胞分子标记物被鉴定出来，如PDGFRa
、Mbp、CNP、SOX-10
。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠神经少突胶质采用消化
、混合细胞营养缺失培养
、摇床振荡结合差速贴壁法并通过专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠神经少突胶质经GC（Galactocerebroside）免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含B-27 Supplement

、PDGF-AA
、bFGF、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min


，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠毒蕈碱型乙酰受体(M-AChR)检测试剂盒 ，英文名
： M-AChR ELISA Kit

Porcine growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 猪生长激素释放多肽(GHRP)检测试剂盒

植物源性成分(RBCL)核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforLTB4(MouseLeukoieneB4)ELISAKit小鼠白三烯B4

体液总脂肪酶(lipase)活性比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitHSP-70鸡热休克蛋白70

CD3D & CD3E重组食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

Matriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因 0.5mgMatriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因)抗原

CD19重组人 CD19 / Leu-12 蛋白 Protein

CD28 Protein Human 重组人 CD28 / TP44 蛋白

BDNF Protein Mouse 重组小鼠 / 人 BDNF 蛋白

Matriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因 0.5mgMatriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因)抗原

CD28 Protein Human 重组人 CD28 / TP44 蛋白

CD3D & CD3E重组食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

BDNF Protein Mouse 重组小鼠 / 人 BDNF 蛋白

CD19重组人 CD19 / Leu-12 蛋白 Protein

小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human exactable nuclear aigen (ENA) ELISA Kit 人可提取核抗原(ENA)检测试剂盒

Humannicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit 人腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor(PINP)ELISAKit大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽

饮料糖精(saccharin)含量紫外光谱法定量检测试剂盒20次

MouseIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit小鼠缺血修饰白蛋白(IMA)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠神经少突胶质细胞小鼠正常T细胞表达和分泌因子(RAES/CCL5)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠载脂蛋白H(Apo-H)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠载脂蛋白E(Apo-E)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装