實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠神經少突膠質分離自腦皮層組織 ；大腦分左右兩個半球 ，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分 ，它是神經元胞體集中的地方 。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質 。每一個半球都有三個麵 ，即外側麵（約占整個皮質麵積的1/3） 、內側麵和底麵（占2/3的麵積） ；半球表麵有很多深淺不等的溝或裂 ，溝或裂之間的隆起叫回 ，它們大大增加了大腦的表麵積 ；大腦外側麵重要的溝 、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝 。由於三溝裂之界隔 ，使大腦皮質組分為額葉 、頂葉 、顳葉 、枕葉四大部分 。少突膠質細胞分布於中樞神經係統 ，在銀浸染標本中 ，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小 ，其突起也較小而少 ，呈珠狀 ，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。但是用特異性免疫細胞化學染色顯示的少突膠質細胞 ，其突起並不少 ，而且還有許多分支 。少突膠質細胞的主要功能是在中樞神經係統中包繞軸突 、形成絕緣的髓鞘結構 、協助生物電信號的跳躍式高效傳遞並維持和保護神經元的正常功能 。其異常不僅會導致中樞神經係統脫髓鞘病變 ，還會引起神經元損傷或精神類疾病 ，甚至可以引發腦腫瘤 。根據少突膠質細胞的分布和位置可分為三種 ：①束間少突膠質細胞（interfasicular-oligodendrocyte） ，分布在中樞神經係統的白質的神經纖維束之間 ；②神經細胞周少突膠質細胞（perineuronal-oligodendrocyte） ，分布在中樞神經係統的灰質區 ，常位於神經細胞周圍 ，與神經細胞的關係密切 ，故又稱為神經細胞周衛星細胞（perineuronal-satellite-cell） ，但在神經細胞胞體與此類細胞之間亦常有星形膠質細胞的薄片狀突起分隔 ；③血管周少突膠質細胞（pcrivascular-oligodendrocyte） ，主要分布在中樞神經係統內的血管周圍 。少突膠質細胞形成的髓鞘膜是最為特化和複雜動物細胞膜之一 ，其上有眾多跨膜蛋白和表麵蛋白用以維持髓鞘的致密穩定結構 。如半乳糖腦苷脂（GC） ，它是髓鞘的一種主要類脂 ，用GC抗體鑒別成熟的少突膠質細胞是一種比較早的免疫鑒定方法 。近十年來 ，神經發育學科進展較快 ，更多的少突膠質細胞分子標記物被鑒定出來 ，如PDGFRa 、Mbp 、CNP 、SOX-10 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠神經少突膠質采用消化 、混合細胞營養缺失培養 、搖床振蕩結合差速貼壁法並通過專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠神經少突膠質經GC（Galactocerebroside）免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 Supplement 、PDGF-AA、bFGF 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 不增殖 ；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代 。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠毒蕈堿型乙酰受體(M-AChR)檢測試劑盒 ，英文名 ： M-AChR ELISA Kit

Porcine growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 豬生長激素釋放多肽(GHRP)檢測試劑盒

植物源性成分(RBCL)核酸檢測試劑盒 48T

CLIAKitforLTB4(MouseLeukoieneB4)ELISAKit小鼠白三烯B4

體液總脂肪酶(lipase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitHSP-70雞熱休克蛋白70

CD3D & CD3E重組食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

Matriptase 蛋白裂解酶(一種新的癌基因 0.5mgMatriptase 蛋白裂解酶(一種新的癌基因)抗原

CD19重組人 CD19 / Leu-12 蛋白 Protein

CD28 Protein Human 重組人 CD28 / TP44 蛋白

BDNF Protein Mouse 重組小鼠 / 人 BDNF 蛋白

Matriptase 蛋白裂解酶(一種新的癌基因 0.5mgMatriptase 蛋白裂解酶(一種新的癌基因)抗原

CD28 Protein Human 重組人 CD28 / TP44 蛋白

CD3D & CD3E重組食蟹猴 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein

BDNF Protein Mouse 重組小鼠 / 人 BDNF 蛋白

CD19重組人 CD19 / Leu-12 蛋白 Protein

小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human exactable nuclear aigen (ENA) ELISA Kit 人可提取核抗原(ENA)檢測試劑盒

Humannicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit 人腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor(PINP)ELISAKit大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽

飲料糖精(saccharin)含量紫外光譜法定量檢測試劑盒20次

MouseIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠神經少突膠質細胞小鼠正常T細胞表達和分泌因子(RAES/CCL5)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠載脂蛋白H(Apo-H)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠載脂蛋白E(Apo-E)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝