細胞簡介 ：

大鼠神經少突膠質前體分離自腦皮層組織 ；大腦分左右兩個半球 ，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分 ，它是神經元胞體集中的地方 。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質 。少突膠質細胞分布於中樞神經係統 ，在銀浸染標本中 ，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小 ，其突起也較小而少 ，呈珠狀 ，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞 。少突膠質細胞（oligodendrocyte）是中樞神經係統（CNS）的成髓鞘神經膠質細胞 ，其發育要經曆少突膠質細胞祖細胞 、前少突膠質細胞祖細胞 、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段 。有學者將少突膠質細胞按其發育程度和形態分為三型 。但是 ，細胞發育是一個連續的過程，其形態 、表達產物和功能的演變沒有嚴格的界限 ，因此 ，其分類是相對的 。這三型分別為 ：Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell） 。細胞呈圓形 ，表麵光滑 ，直徑約3μm ，體外混合培養時成簇生長在星形膠質表麵 ，具有很強的分裂增殖潛力 ，表達GM1 、波形蛋白和多唾液酸—神經粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule ，PSA-NCAM）等 。Ⅱ型少突膠質細胞胞體常有雙極或三極突起 ，極少數為單極突起 ，直徑約7μm ，有一定的分裂增殖能力 。體外培養時為雙潛能細胞 ，既可分化為少突膠質細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質 ，故又稱為少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell ，O2A） 。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產生GQ的抗體） ，故常用A2B5抗體標記O2A 。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力 ，為分裂終期細胞 。直徑約10μm 。根據其形成髓鞘的能力 ，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質細胞 。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起 ，表麵還殘留有A2B5標記物 ，同時也表達O1-O4抗原 ，無形成髓鞘的能力 。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網 ，大量表達半乳糖腦苷脂（galactocerebro side ，GC） 、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein ，PLP） 、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein ，MBP）等 ，有對軸突髓鞘化的能力 。體外培養的少突膠質細胞前體細胞（簡稱少突膠質細胞前體細胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質細胞 ，前兩者具有增殖能力 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠神經少突膠質采用消化 、混合細胞營養缺失培養 、搖床振蕩結合差速貼壁法並通過專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×105cells/瓶

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠神經少突膠質前體經A2B5免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 、PDGF 、bFGF 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次 ；

生長特性 貼壁

細胞形態 雙極 、多極形

傳代特性 不傳代 ，不增殖 ，存活1-2周

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠頂體蛋白(ACR)檢測試劑盒  ，英文名 ： ACR ELISA Kit

Porcine growth hormone releasing peptide GHR 豬生長激素釋放肽ghr

木瓜特定基因序列(Papaya)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforLTB4(HumanLeukoieneB4)ELISAKit人白三烯B4

體液組織蛋白酶B(CATHEPSINB)活性熒光定量檢測試劑盒20次

ELISAKitHsp-60雞熱休克蛋白60

REG4重組小鼠 REG4 / GISP / RELP 蛋白 Protein

AMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase 0.5mgAMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase) α-甲基酰基消旋酶抗原

IL36A重組人 IL1F6 / IL36 蛋白 (aa 6-158) Protein

CD276 Protein Human 重組人 B7-H3 / CD276 蛋白

TNFSF15 Protein Rat 重組大鼠 TNFSF15 / TL1A 蛋白 (Fc 標簽)

AMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase 0.5mgAMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase) α-甲基酰基消旋酶抗原

CD276 Protein Human 重組人 B7-H3 / CD276 蛋白

REG4重組小鼠 REG4 / GISP / RELP 蛋白 Protein

TNFSF15 Protein Rat 重組大鼠 TNFSF15 / TL1A 蛋白 (Fc 標簽)

IL36A重組人 IL1F6 / IL36 蛋白 (aa 6-158) Protein

小鼠血小板因子3(PF-3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble ansferrin receptor (sTfR) ELISA Kit 人可溶性轉鐵蛋白受體(sTfR)檢測試劑盒

Human5-Nucleotidase,5-ELISAKit 人5核苷酸酶(5-)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

(pIKBAlpha)ELISAKit大鼠0酸化核因子κB抑製蛋白α

飲料糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測試劑盒20次

Mouseisletcellaibody,ICAELISAKit小鼠胰島細胞抗體(ICA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠神經少突膠質前體細胞小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名稱   方法   規格

小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。