老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

大鼠肠动脉内皮分离自肠动脉

；肠道指的是从胃幽门至门的消化管

。肠是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段
。哺乳动物的肠包括小肠
、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经门排出体外

。肠道堪称身体最劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足够的养分，其实它的功能还远不止此——它还是机体内最大的微生态系统
。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肠动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法
、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肠动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2

，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代


。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

大鼠A(CsA)检测试剂盒 ，英文名： CsA ELISA Kit

Rabbit ai smooth muscle aibody (ASMA) ELISA Kit 兔抗平滑肌抗体(ASMA)检测试剂盒

登革热病毒Ⅰ型(DFV-Ⅰ)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T

CLIAKitformouseIgAELISAkit小鼠免疫球蛋白IgA

体液环氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKiX人Ⅰ型胶原N末端肽

FGFR4重组大鼠 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

GRGDS peptide 粘附多肽GRGDS 1mgGRGDS peptide 粘附多肽GRGDS

CHI3L2重组人 CHI3L2 / YKL-39 蛋白 Protein

CANT1 Protein Human 重组人 CANT1 蛋白 (Fc 标签)

FGF21 Protein Mouse 重组小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 蛋白

GRGDS peptide 粘附多肽GRGDS 1mgGRGDS peptide 粘附多肽GRGDS

CANT1 Protein Human 重组人 CANT1 蛋白 (Fc 标签)

FGFR4重组大鼠 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

FGF21 Protein Mouse 重组小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 蛋白

CHI3L2重组人 CHI3L2 / YKL-39 蛋白 Protein

鸭白介素1(IL-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human neuronal nuclear aibody type 1 / ai Hu aibody (ANNA-1/Hu) ELISA Kit 人抗神经元核抗体1型/抗Hu抗体(ANNA-1/Hu)检测试剂盒

Humanansferrieceptor,TFRELISAKit 人转铁蛋白受体(TFR/CD71)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAChRabELISAKit大鼠乙酰受体抗体

洋葱培养基500毫升溶液/片剂

MousePhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit小鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠肠动脉内皮细胞羊促卵泡素(FSH)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

羊促黄体激素(LH)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

羊雌三醇(E3)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

羊雌激素(E)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装