細胞簡介：

大鼠腸道幹分離自腸道組織 ；腸道指的是從胃幽門至門的消化管 。腸是消化管中最長的一段 ，也是功能最重要的一段 。哺乳動物的腸包括小腸 、大腸和直腸3大段 。大量的消化作用和幾乎全部消化產物的吸收都是在小腸內進行的，大腸主要濃縮食物殘渣 ，形成糞便 ，再通過直腸經門排出體外 。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化 、吸收食物 ，以提供足夠的養分 ，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內最大的微生態係統 。腸道幹細胞（ISC）也稱腸道上皮幹細胞 ，主要位於腸黏膜隱窩內 ，其與腸道黏膜上皮的更新和修複密切相關 。正常情況下 ，位於隱窩基底部的腸道幹細胞不斷向隱窩頂部（腸腔方向）遷移 ，整個遷移過程大約3-5d ，在遷移過程中腸道幹細胞分化形成不同的腸黏膜細胞 。當受到外界生理或病理信號作用時 ，ISC可持續增殖 、分化為成熟腸上皮細胞 ，如腸型細胞 、杯狀細胞 、內分泌細胞和潘氏細胞等 ，從而維持腸道黏膜結構和功能的穩定性 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠腸道幹采用-膠原酶聯合消化後 ，用腸道幹細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠腸道幹經MSI-1免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 球形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠S100B蛋白(S100B)檢測試劑盒  ，英文名 ： S100B ELISA Kit

Mouse azidothymidine (AZT) ELISA Kit 小鼠(AZT)檢測試劑盒

ELISA 小鼠活化調節趨化因子(mouse TARC)  進口分裝

CLIAKitforIFN-Beta/IFNB(MouseIerferonBeta)ELISAKit小鼠β幹擾素

通用型(avianinfluenza;AI)試劑盒20次

ELISAKitVC大鼠C

TNFRSF1A重組小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 Protein

Bcl-2(抗原 0.5mgBcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)

CCL22重組人 CCL22 / MDC 蛋白 Protein

GPNMB Protein Human 重組人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白

FLT1 Protein Rat 重組大鼠 VEGFR1 / FLT-1 蛋白

Bcl-2(抗原 0.5mgBcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原)

GPNMB Protein Human 重組人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白

TNFRSF1A重組小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 Protein

FLT1 Protein Rat 重組大鼠 VEGFR1 / FLT-1 蛋白

CCL22重組人 CCL22 / MDC 蛋白 Protein

小鼠β內啡肽受體(β-EPR)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human vitamin B6 (VB6) ELISA Kit 人B6(VB6)檢測試劑盒

HumanCollagenaseTypeIIELISAKit 人膠原酶II(CollagenaseII)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanc-fos檢測試劑盒人c-fos檢測試劑盒規格 ：96T/48T

轉基因玉米MON863品係基因定量檢測試劑盒20次

Humanserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit人絲/蘇蛋酸酶(STK)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠腸道幹細胞兔子D二聚體(D2D)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子C反應蛋白(CRP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。