老哥俱乐部

细胞简介

：

‍胃是人体的消化器官
，位于膈下
，胃壁由黏膜
、黏膜下层
、肌层和外膜四层组成，并有神经、血管和管的分布
。其中平滑肌主要位于肌层中
，胃的肌层发达，由内斜
、中环和外纵三层平滑肌构成

。其中，中层环形平滑肌在幽门处增厚
，形成幽门括约肌

，具有节制胃内容物排出的作用。

胃动力性的发生与平滑肌的收缩性的改变密切相关
，现已有充分证据说明
， Cajal间质细胞是胃部运动的起搏细胞，它存在于环形肌与纵行肌之间，并紧靠肌间神经丛
；同时Ca2+在平滑肌的收缩中起着重要的信使作用

，这些都是胃动力性研究中的重要方向。

细胞特性
：

1） 细胞来源于人正常胃组织。

2) 细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体
、
、酵母和
。

5) 细胞生长方式：长梭状细胞

，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代平滑肌细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

MTELISAKit

大鼠胆囊收缩素/肠促肽(CCK)elisa分析检测试剂盒

CCK ELISA Kit

山羊C型钠尿肽(CNP)elisa分析检测试剂盒

CNPELISAKit

人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)elisa检测试剂盒

酶连续循环比色法定量检测试剂盒

小鼠糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)elisa检测试剂盒

大鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)elisa分析检测试剂盒

狗微管相关蛋白tau(MAPT)elisa分析检测试剂盒

MAPT ELISA kit

人单丝蛋白激酶1(LIMK1)elisa分析检测试剂盒

HumanLIMK1ELISAKit

大鼠白介素15(IL-15)elisa分析检测试剂盒

小鼠胎盘钙黏蛋白(CDHP)elisa检测试剂盒

人Toll样受体7(TLR7)elisa检测试剂盒

组织钙调蛋白（CaM）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒

肌球蛋白IIIB抗体

Myosin IIIB

纤维母细胞生长因子6抗体

FGF6

Thimet内肽酶抗体  Anti-THOP1/Thimet Oligopeptidase

Rho鸟甘酸转运蛋白抗体  Anti-PDZ RHOGEF/GTRAP48

谷受体调节蛋白2抗体  Anti-NARG2

蛋白酶抑制剂14抗体  Anti-SERPINI2/PI14

PE-Cy7标记的兔抗水IgG H&L

猪乙脑病毒包膜蛋白抗体

JEV E

碳酸酐酶4抗体

人胃平滑肌细胞CAIV/Carbonic Anhydrase IV