老哥俱乐部

细胞简介
：

胃是人体的消化器官
，位于膈下，胃壁由黏膜
、黏膜下层
、肌层和外膜四层组成，并有神经、血管和管的分布。其中成纤维细胞主要分布于粘膜层中的固有层、黏膜下层和外膜层。

成纤维细胞是结缔组织中常见的细胞，电镜下，成纤维细胞胞质内可见丰富的粗面内质网、游离核糖体和高尔基复合体
，表明其具有合成和分泌蛋白质的功能
。己知成纤维细胞的主要功能之一是合成胶原蛋白及其他细胞外基质，在组织器官纤维化过程中发挥重要作用
。

细胞特性：

1）细胞来源于手术切除的正常胃组织
。

2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性

。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和
。

5)细胞生长方式
：成纤维样细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基

、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片


，是正常现象

。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况


，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA 试剂盒

Rat ai cardiolipin aibody IgA (ACA-IgA) ELISA Kit 大鼠抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)检测试剂盒

Humahioredoxieductase,xRELISAKit 人硫氧还蛋白还原酶(xR)检测试剂盒 进口分装

HumanaibodytogroupAseptococcalpolysaccharide,ASP检测试剂盒人A组链球菌菌壁多糖抗体(ASP)检测试剂盒

植物过氧化氢酶(CATALASE)过氧化活性比色法定量检测试剂盒20次

Humanα-sarcomericactin,α-SCAELISAKit人α横纹肌肌动蛋白(α-SCA)检测试剂盒

HAVCR1重组食蟹猴 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 Protein

MTLC (c-Myc target from laryngeal cancer cells 0.5mgMTLC (c-Myc target from laryngeal cancer cells)又称：MYC 致癌基因(抗原)

SIRT1重组人 SIRT1 / SIR2L1 蛋白 (His 标签) Protein

AHSP Protein Human 重组人 AHSP / ERAF 蛋白

SHH Protein Mouse 重组小鼠 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (His 标签)

MTLC (c-Myc target from laryngeal cancer cells 0.5mgMTLC (c-Myc target from laryngeal cancer cells)又称
：MYC 致癌基因(抗原)

AHSP Protein Human 重组人 AHSP / ERAF 蛋白

HAVCR1重组食蟹猴 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 Protein

SHH Protein Mouse 重组小鼠 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (His 标签)

SIRT1重组人 SIRT1 / SIR2L1 蛋白 (His 标签) Protein

猪α葡萄糖苷酶(α-Glu)检测试剂盒

Human ai ierferon alpha (IFN alpha -Ab) aibody ELISA Kit 人抗α干扰素抗体(IFNα-Ab)检测试剂盒

Porcineierleukin4,IL-4ELISAKit 猪白介素4(IL-4)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforAhCGAb(Humanai-chorionicgonadoopin-aibody)ELISAKit人抗染色体抗体

血液牛病毒性腹泻病毒II型(BovineViralDiarrhoeaVirus-2;BVDV-2)定性试剂盒20次

MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKit小鼠坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)检测试剂盒

人胃成纤维细胞质粒小量提取试剂盒   Plasmid Exaction Kit

高度质粒小量提取试剂盒   High purity Plasmid Exaction Kit

质粒中量提取试剂盒   Plasmid Exaction Kit

高度质粒中量提取试剂盒   High purity plasmid exact Kit