老哥俱乐部

细胞简介：

小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连
，是食物消化吸收的主要场所。一般根据形态和结构变化将小肠分为三段，分别为十二指肠
，空肠和回肠


。小肠壁结构一般分 4层，由外向内依次为：浆膜层，平滑肌层，粘膜下层和粘膜层。粘膜层又分为3层
：靠近粘膜下层的是一层平滑肌，称为粘膜肌层
。其次为结缔组织
，又称为固有层。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的粘膜。

成纤维细胞是结缔组织中常见的细胞
，电镜下，成纤维细胞胞质内可见丰富的粗面内质网、游离核糖体和高尔基复合体，表明其具有合成和分泌蛋白质的功能
。己知成纤维细胞的主要功能之一是合成胶原蛋白及其他细胞外基质
，在组织器官纤维化过程中发挥重要作用

。

细胞特性：

1）细胞来源于手术切除的正常小肠组织。

2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和
。

5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基

、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

Sirt1ELISAKit

田鼠睾酮(T)elisa分析检测试剂盒

T ELISA kit

人白介素26(IL-26)elisa分析检测试剂盒

IL-26ELISAKit

石蜡切片组织GSK-3ALPHA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒

绵羊elisa检测试剂盒

乙醇酸含量试剂盒

小鼠精/丝丰富剪接因子4(SRSF4)elisa检测试剂盒

低密度脂蛋白受体相关蛋白5+6抗体

LRP5 + LRP6

脑蛋白44抗体

BRP44

可溶性载质转运蛋白3A1抗体  Anti-SLCO3A1/OATP-D

环指蛋白32抗体  Anti-RNF32

神经肽Y受体5抗体  Anti-NPY5R

锌指蛋白852抗体  Anti-ZNF852

精子发生相关蛋白7抗体

SPATA7

晶状体蛋白γ4抗体

CRYGD

丝/精相关核基质蛋白3抗体  Anti-SRRM3

磷酸化蛋白磷酸酶2抗体  Anti-Phospho-PTPN11/SHP2 (Tyr477)

蛋白Z抗体  Anti-Protein Z

生精细胞凋亡相关基因3抗体  Anti-TSARG3/TSARG1

罗丹明标记豚鼠IgM

钾离子通道多聚体结构域蛋白21抗体

KCTD21

脑血管内皮细胞粘附分子1抗体

人小肠成纤维细胞CEECAM1