試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
。往預先包被乙酰羧化酶合成酶（ACC）抗體的包被微孔中
，依次加入標本
、標準品
、HRP標記的檢測抗體
，經過溫育並*洗滌
。用底物TMB顯色
，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色
，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰羧化酶合成酶（ACC）呈正相關
。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）
，計算樣品濃度
。
樣品收集
、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3）
，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑製劑
。
2. 標本采集後盡早進行提取
，提取按相關文獻進行
。
3. 植物萃取液或其它相關樣本
：請1000 x g離心20分鍾
，取上清即可檢測
。
4. 保存
：如果樣本收集後不及時檢測
，請按一次用量分裝
，凍存於-20℃，避免反複凍融
，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。
植物乙酰羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃
，使用前室溫平衡20分鍾
。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶
，這屬於正常現象
，水浴加熱使結晶*溶解後再使用
。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中
，密封（低溫幹燥）保存
。
濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白
；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍
，zui終結果乘以5才是樣本實際濃度
。
嚴格按照說明書中標明的時間
、加液量及順序進行溫育操作
。
所有液體組分使用前充分搖勻
。
試劑盒組成
注
：標準品（S0-S5）濃度依次為
：0
、1
、2
、4
、8
、16 U/L
試劑的準備
20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1
：20稀釋
，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水
。
洗板方法
手工洗板
：甩盡孔內液體
，每孔加滿洗滌液
，靜置1min後甩盡孔內液體
，在吸水紙上拍幹
，如此洗板5次
。
自動洗板機
：每孔注入洗液350μL
，浸泡1min
，洗板5次
。
操作步驟
從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條
，剩餘板條用自封袋密封放回4℃
。
設置標準品孔和樣本孔
，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL
；
樣本孔先加待測樣本10μL
，再加樣本稀釋液40μL
；空白孔不加
。
除空白孔外
，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL
，用封板膜封住反應孔
，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min
。
棄去液體
，吸水紙上拍幹
，每孔加滿洗滌液
，靜置1min
，甩去洗滌液
，吸水紙上拍幹
，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）
。
每孔加入底物A
、B各50μL
，37℃避光孵育15min
。
每孔加入終止液50μL
，15min內
，在450nm波長處測定各孔的OD值
。
結果判斷
繪製標準曲線
：在Excel工作表中
，以標準品濃度作橫坐標
，對應OD值作縱坐標
，繪製出標準品線性回歸曲線
，按曲線方程計算各樣本濃度值
。
植物乙酰羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒試劑盒性能
1. 準確性
：標準品線性回歸與預期濃度相關係數R值
，大於等於0.9900
。
2. 靈敏度
：zui低檢測濃度小於0.1 U/L
。
3. 特異性
：不與其它可溶性結構類似物交叉反應
。
4. 重複性
：板內
、板間變異係數均小於15%
。
5. 貯藏
：2-8℃
，避光防潮保存
。
6. 有效期
：6個月