樣本要求
1
、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）
，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑製劑
。
2
、標本采集後盡早進行提取
，提取按相關文獻進行
，提取後應盡快進行實驗
。若不能立即試驗
，可將標本放於-20℃保存
，但應避免反複凍融
。
3
、樣本應充分離心
，不得有溶血及顆粒
。
操作步驟
1
、準備
：從冰箱取出試劑盒
，室溫複溫平衡30分鍾
。
2
、配液
：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液
。
3
、加標準品和待測樣本
：取足夠數量的酶標包被板
，固定於框架上
，分別設置標準品孔
、待測樣本孔和空白對照孔
，記錄各孔位置
，在標準品孔中加入標準品50μL
；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL
，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）
；空白對照孔不加
。
4
、溫育
：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min
。
5
、洗板
：棄去液體
，吸水紙上拍幹
，每孔加滿洗滌液
，靜置1min
，甩去洗滌液
，吸水紙上拍幹
，如此重複洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）
。
6
、加酶標工作液
：每孔加入酶標工作液50μL
，空白對照孔不加
。
7
、溫育
：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min
。
8
、洗板
：棄去液體
，吸水紙上拍幹
，每孔加滿洗滌液
，靜置1min
，甩去洗滌液
，吸水紙上拍幹
，如此重複洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）
。
9
、顯色
：每孔先加入顯色劑A 液50μL
，再加入顯色劑B液 50μL
，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）
，37℃避光顯色15min
。
10
、終止
：取出酶標板
，每孔加終止液50μL
，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）
。
11
、測定
：以空白孔調零
，在終止後15分鍾內
，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）
。
12
、計算
：根據標準品的濃度及對應的OD值
，計算出標準曲線的直線回歸方程
，再根據樣本的OD值
，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度
，也可以使用各種應用軟件來計算
。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數
。
注意事項
1
、實驗嚴格按照說明書的操作進行
，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準
。
2
、酶標包被板開封後如未用完
，應立即裝入密封袋中加幹燥劑保存
。
3
、建議所有的標準品
、樣本和空白對照都做雙份檢測
，取平均值
，以減小實驗誤差
。
4
、牢記樣本已經稀釋5倍
，計算結果乘以5才是樣本實際濃度
。
5
、本試劑盒定量範圍為25-800ng/L
，超過此範圍
，為標準曲線延伸計算所得
，不做為準確定量結果
，請用特殊稀釋液稀釋後測定準確結果（25-800ng/L範圍內）
，乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度
。
6、若顯色過淺
，可適當延長底物溫育時間
。
7
、為避免交叉汙染
，標準品
、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭
；酶標工作液
、樣本稀釋液和底物等公共組分
，要懸臂加樣
，不得碰到微孔
；不得重複使用封板膜
。
8
、試劑盒保質期內使用
，不同批號的試劑不得混用
。
9
、底物B對光敏感
，避免長時間暴露於光下
。