應用雙抗體夾心法測定標本中人血管內皮細胞粘附因子(VCAM)水平 。用純化的人血管內皮細胞粘附因子(VCAM)抗體包被微孔板 ，製成固相抗體 ，往包被單抗的微孔中依次加入血管內皮細胞粘附因子(VCAM) ，再與HRP標記的血管內皮細胞粘附因子(VCAM)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物 ，經過*洗滌後加底物TMB顯色 。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色 ，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色 。顏色的深淺和樣品中的血管內皮細胞粘附因子(VCAM)呈正相關 。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值） ，通過標準曲線計算樣品中人血管內皮細胞粘附因子(VCAM)濃度 。

人血管內皮細胞粘附因子(VCAM)elisa試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（1200µg/L）0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

標本要求

1．標本采集後盡早進行提取 ，提取按相關文獻進行 ，提取後應盡快進行實驗 。若不能馬上進行試驗 ，可將標本放於-20℃保存 ，但應避免反複凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性 。

人血管內皮細胞粘附因子(VCAM)elisa試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支 ，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋 。

600µg/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

300µg/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液

150µg/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液

75µg/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液

37.5µg/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液

2.加樣 ：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同） 、標準孔 、待測樣品孔 。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl ，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl ，然後再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍） 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 。

3.溫育 ：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。

4.配液 ：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5.洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去 ，如此重複5次 ，拍幹 。

6.加酶 ：每孔加入酶標試劑50µl ，空白孔除外 。

7.溫育 ：操作同3 。

8.洗滌 ：操作同5 。

9.顯色 ：每孔先加入顯色劑A50µl ，再加入顯色劑B50µl ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色10分鍾.

10.終止 ：每孔加終止液50µl ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

11.測定 ：以空白空調零 ，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 。測定應在加終止液後15分鍾以內進行 。

人血管內皮細胞粘附因子(VCAM)elisa試劑盒計算

以標準物的濃度為橫坐標 ，OD值為縱坐標 ，在坐標紙上繪出標準曲線 ，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度 ；再乘以稀釋倍數 ；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式 ，將樣品的OD值代入方程式 ，計算出樣品濃度 ，再乘以稀釋倍數 ，即為樣品的實際濃度 。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用 ，酶標包被板開封後如未用完 ，板條應裝入密封袋中保存 。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出 ，稀釋時可在水浴中加溫助溶 ，洗滌時不影響結果 。

3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性 ，以避免試驗誤差 。一次加樣時間控製在5分鍾內 ，如標本數量多 ，使用排槍加樣 。

4．請每次測定的同時做標準曲線 ，做複孔 。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定 ，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜隻限一次性使用 ，以避免交叉汙染 。

6．底物請避光保存 。

7．嚴格按照說明書的操作進行 ，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品 ，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理 。

9．本試劑不同批號組分不得混用 。

人血管內皮細胞粘附因子(VCAM)elisa試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存 ：2-8℃ 。

2．有效期 ：6個月

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