应用双抗体夹心法测定标本中人血管内皮细胞粘附因子(VCAM)水平 。用纯化的人血管内皮细胞粘附因子(VCAM)抗体包被微孔板 ，制成固相抗体 ，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮细胞粘附因子(VCAM)，再与HRP标记的血管内皮细胞粘附因子(VCAM)抗体结合 ，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮细胞粘附因子(VCAM)呈正相关 。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值） ，通过标准曲线计算样品中人血管内皮细胞粘附因子(VCAM)浓度。
人血管内皮细胞粘附因子(VCAM)elisa试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（1200µg/L）0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取 ，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存 ，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
人血管内皮细胞粘附因子(VCAM)elisa试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释 ：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释 。
600µg/L5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
300µg/L4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液
150µg/L3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液
75µg/L2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液
37.5µg/L1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔 。在酶标包被板上标准品准确加样50µl ，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品zui终稀释度为5倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀 。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液 ：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体 ，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同3 。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50µl ，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止 ：每孔加终止液50µl ，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
人血管内皮细胞粘附因子(VCAM)elisa试剂盒计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数 ，即为样品的实际浓度 。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔 。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定 ，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5） 。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染 。
6．底物请避光保存 。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理 。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
人血管内皮细胞粘附因子(VCAM)elisa试剂盒保存条件及有效期
1．试剂盒保存 ：2-8℃。
2．有效期：6个月
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