操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣
:在酶標包被板上設標準品孔10孔
,在di一
、第二孔中分別加標準品100μl
,然後在di一
、第二孔中加標準品稀釋液50μl
,混勻
;然後從di一孔
、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔
,再在第三
、第四孔分別加標準品稀釋液50μl
,混勻
;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉
,再各取50μl分別加到第五
、第六孔中
,再在第五
、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul
,混勻
;混勻後從第五
、第六孔中各取50μl分別加到第七
、第八孔中
,再在第七
、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從第七
、第八孔中分別取50μl加到第九
、第十孔中
,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl
,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉
。(稀釋後各孔加樣量都為50μl
,濃度分別為180 ng/L
,120 ng/L
,60 ng/L
,30 ng/
,15 ng/L)
。
2. 加樣
:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑
,其餘各步操作相同)
、待測樣品孔
。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl
,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)
。加樣將樣品加於酶標板孔底部
,盡量不觸及孔壁
,輕輕晃動混勻
。
3. 溫育
:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾
。
4. 配液
:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後備用
。
5. 洗滌
:小心揭掉封板膜
,棄去液體
,甩幹
,每孔加滿洗滌液
,靜置30秒後棄去
,如此重複5次
,拍幹
。
6. 加酶
:每孔加入酶標試劑50μl
,空白孔除外。
7. 溫育
:操作同3
。
8. 洗滌
:操作同5
。
9. 顯色
:每孔先加入顯色劑A50μl
,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻
,37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止
:每孔加終止液50μl
,終止反應(此時藍色立轉黃色)
。
11. 測定
:以空白空調零
,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)
。 測定應在加終止液後15分鍾
。
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