在E2檢測ELISA試劑盒中通常有三次加樣步聚 ，即加標本 ，加酶聯絡物 ，加底物 。凍住血清融解後 ，蛋白質局部濃縮 ，散布不均 ，應充分混勻宜輕緩 ，避免氣泡 ，可上下倒置混和 ，不要在混勻器上強烈振動 。製備血漿標本需借助於抗凝劑 ，而血清標本隻需待血清天然凝聚 、縮短後即可取得 。ELISA試劑盒也可在板孔中參與稀釋液 ，然後在微型轟動器上轟動1分鍾以保證混和 。通常說來 ，在5天內測定的血清標本可放置於4℃ ，超越一星期測定的需低溫冰存 。

　　可用作ELISA試劑盒測定的標本十分廣泛 ，體液(如血清) 、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液 、糞便)等均可作標本以測定其間某種抗體或抗原成份 ，ELISA試劑盒中本次試驗不需用的有些應及時放回冰箱保存 。在間接法ELISA試劑盒中可使本底加深 。

　　下麵將敘說ELISA試劑盒板式ELISA各個操作過程的留神要害 ，珠式 、管式及磁性球ELSIA ，國外試劑均與格外儀器協作應用 ，嚴峻遵從劃定操作 ，必能得出的成果 。ELISA試劑盒加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部 ，避免加在孔壁上部 ，並留神不可濺起 ，不可產憤慨泡 。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清 ，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋後再加樣 。

　　E2檢測ELISA試劑盒實驗中需留心下列的細節 ：

　　1.嚴格按照規定的時刻和溫度進行溫育以保證成果 。一切試劑都必須在運用前到達室溫20-25℃ 。運用後當即冷藏保存試劑 。

　　2.洗板不正確能夠導致不的成果 。在加入底物前確保盡量吸幹孔內液體 。溫育過程中不要讓微孔枯燥掉 。

　　3.消除板底殘留的液體和手指印 ，否則影響OD值 。

　　4.底物顯色液應呈無色或很淺的色彩 ，現已變藍的底物液不能運用 。

　　5.防止試劑和標本的穿插汙染以免形成錯誤成果 。

　　6.在儲存和溫育時防止強光直接照射 。

　　7.平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上 。

　　8.任何反響試劑不能觸摸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體 。任何漂白成分都會損壞試劑盒中反響試劑的生物活性 。

　　9.不能運用過期產品 。

　　10.E2檢測ELISA試劑盒假如可能傳播疾病 ，一切的樣品都應管理好 ，按照規定的程序處理樣品和檢測設備 。