老哥俱樂部在Wnt-3a蛋白Elisa試劑盒實驗中 ，有時會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發生樣本OD450值低於空白值的現象 ，特別是在血清和血漿樣本中 。這就有可能是基質效應導致的結果 。

　　首先老哥俱樂部要知道什麽是基質 ，基質是指樣品中目標分析物以外的部分。由於基質成分會對分析過程有顯著幹擾 ，影響分析結果的準確性。業內把這些影響統稱為基質效應 。這是Wnt-3a蛋白Elisa試劑盒開發和使用中需要避開的雷 。

　　如何判斷是否是基質效應呢 ？

　　當單個樣本或少量樣本值低於空白值時 ，可能是實驗操作出現問題 ，這時應增加重複 ，進步操作技術 。當許多樣本都低於空白值時 ，應思考基質效應的影響 ，建立校正曲線予以修改 。基質效應的原因錯綜複雜 ，有可能是樣品中存在的基質導致原抗體的聯絡結合能力下降 ，便產生了樣本值低於空白值的現象 。導致樣本值無法計算出數值 ，或許數值為負 。

　　雖然原因複雜 ，但有方法可以用來評估基質效應 。

　　第一種方法是采用線性稀釋 ，一般來講 ，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結合作用很強 ，樣品濃度被稀釋並不影響它們的結合 ，而造成基質效應的非特異結合的力要弱很多 ，如果不斷稀釋樣品 ，非特異結合造成的幹擾會逐步減少 ，測量值也更接近真實值 。沒有基質效應時 ，無論如何稀釋 ，測量值都和真實值吻合 。而有基質效應時 ，稀釋會造成非特異性結合比例的減少 ，測量值也相應地產生很大改變 。

　　第二種方法是摻入回收率實驗 ，將低 、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中 ，摻入前後實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率 ，回收率以百分比的形式呈現 。回收率介於80-120% ，才符合標準 。

　　那老哥俱樂部如何避免ELISA實驗中基質效應 ？

　　基質效應可以通過產品階段的優化盡可能去消除的 。我司針對ELISA產品進行了多種優化 。Wnt-3a蛋白Elisa試劑盒在開發進程中 ，標準品不選用人或動物血清 、血漿作為標準曲線的稀釋液 ，隻能選用其仿照物 。老哥俱樂部量身定製的緩衝液係統 ，這些優化後的緩衝液體係能很好消除基質效應 。還有當檢測某個分析物時 ，其他相關因子或類似結構因子如果有非特異性結合 ，也會導致基質效應 ，老哥俱樂部也因此做了大量的交叉反應 ，確保沒有明顯的交叉反應和幹擾 。而且老哥俱樂部試劑盒必須通過嚴格的基質效應測試 ，全部包括線性稀釋和摻入回收率實驗 ，並把測試結果記錄在說明書中 。