實驗操作:

1. 模板製備（樣本製備區）

建議使用配套水生動物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒係列產品 ，具體過程詳見產品說明書 。

2．添加模板（模板添加區 ，放置於冰盒中進行）

請於-20℃條件下保存 ，有效期 12 個月

取出所需測試數的已含有反應液 A-TSV-I 的 PCR 管 ，將試劑*解凍 ，離心 30 秒 ，在管蓋上標記管名（陰性對照管 NG 、樣品 XX 、陽性對照管 PG） 。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I ，蓋上陰性對照管管蓋 ，其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板 ，順序為待測樣品模板 、PG-TSV-I ，依次蓋好各管管蓋 ，離心 30 秒，立即進行擴增反應 。

3. 擴增反應（擴增及產物分析區）

①恒溫儀器 63℃條件下反應 60 min 。待儀器升溫至 63℃後 ，新建程序 ，設置實驗名稱及反應時間 ，將步驟 2中離心後的 PCR 反應管放入恒溫熒光分子檢測儀 ，點擊開始檢測 。

②若使用熒光定量 PCR 儀 ，則熒光基團選擇 FAM ，淬滅基團選擇 None ，將 63℃ 15 s ，63℃ 45 s 作為一個循環 ，於 63℃ 45 s 處收集熒光信號 ，60 個循環 。

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