細胞簡介 ：

豬前脂肪分離自脂肪組織 ；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細胞構成 ，聚集成團的脂肪細胞由薄層疏鬆結締組織分隔成小葉 ；貯存的脂肪 ，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸 ，經血液輸送到各組織以供利用 。它們影響胰島素敏感性 、血壓水平 、內皮功能 、纖溶活動及炎症反應 ，參與多種重要病理生理過程 ；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內分泌係統 。脂肪組織在體內含有兩種主要的細胞 ：一種是在胞漿內積聚脂滴的成熟脂肪細胞 ；另一種是雖未在胞漿內積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細胞 。前脂肪細胞呈梭形 ，有分裂和增殖的能力 ；成熟的脂肪細胞呈圓形 ，已經失去了分裂及增殖的能力 。由於前脂肪細胞是一類具有增殖和向脂肪細胞分化能力的特異化前體細胞 ，與肥胖有著非常密切的關係 。前脂肪細胞是一種類成纖維細胞 ，在演變的過程中不斷吸收脂質 ，終成為成熟的脂肪細胞 。前脂肪細胞對外界機械損傷的抵抗力較強 ，可望成為軟組織缺損的有益填充物 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的豬前脂肪采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的豬前脂肪經油紅O染色檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)檢測試劑盒  ，英文名 ： 8-iso-PG ELISA Kit

Mouse maix metalloproteinase 1 (MMP-1) ELISA Kit 小鼠基質金屬蛋白酶1(MMP-1)檢測試劑盒

MouseHexokinase,HKELISAKit 小鼠己糖激酶(HK)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforhumansimilaoRIKENcDNA2010109K09geneELISAKIT人類似RIKENcDNA2010109K09基因

通用型魚細菌性(BacterialKidneyDisease)試劑盒20次

ELISAKitFⅧ-Ag大鼠Ⅷ相關抗原

HA重組甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

pectinesterase inhibitor 18 peptide 果膠酶抗原 0.5mgpectinesterase inhibitor 18 peptide 果膠酶抗原

PCSK1重組人 PCSK1 / NEC1 蛋白 Protein

EEF1E1 Protein Human 重組人 EEF1E1 / AIMP3 / p18 蛋白

FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白

pectinesterase inhibitor 18 peptide 果膠酶抗原 0.5mgpectinesterase inhibitor 18 peptide 果膠酶抗原

EEF1E1 Protein Human 重組人 EEF1E1 / AIMP3 / p18 蛋白

HA重組甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白

PCSK1重組人 PCSK1 / NEC1 蛋白 Protein

小鼠解偶聯蛋白1(UCP1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai cardiolipin aibody IgM (ACA-IgM) ELISA Kit 大鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)檢測試劑盒

HumanCalreticulin,CELISAKit 人鈣網蛋白(C)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-calmodulinspecificaibody,CaM-ab檢測試劑盒人抗鈣調素特異抗體(CAM-ab)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物核同糖1,5二0酸羧化/加氧酶(RUBPCase/Rubisco)加氧活性定量檢測試劑盒20次

Humanα-glathioneS-ansferases ，α-GSTELISAKit人αS轉移酶(α-GST)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

豬前脂肪細胞小鼠凋亡相關因子(FAS/CD95)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠第八因子相關抗原(FⅧAg)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抵抗素(Resistin)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠低氧誘導因子1α(HIF-1α)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。