老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠牙龈上皮分离自牙龈组织
；牙龈是附着在牙颈和牙槽突部分的粘膜组织
，呈粉红色、有光泽、质坚韧
。牙龈边缘称为龈缘
，正常呈月芽形。龈缘与牙颈之间的小沟称龈沟。两邻牙之间的牙龈突起称龈乳突。也叫齿龈，通称牙床；是指包住齿颈的黏膜组织，粉红色，内有很多血管和神经
。牙龈上皮长期被认为是抵御口腔中持续存在的细菌的被动免疫屏障
，随着对牙周致病菌的不断认识，发现牙龈上皮不仅仅是抵御微生物的物理屏障
，上皮细胞还可以分泌抗菌多肽，参与先天性免疫
。牙龈上皮作为牙周组织的道屏障，在抵御牙周炎细菌入侵的过程中发挥了重要作用，建立正常牙龈上皮细胞体外培养体系，将为各种牙龈上皮相关的研究提供稳定的实验模型。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠牙龈上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠牙龈上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5

、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)检测试剂盒
，英文名
： Col Ⅰ ELISA Kit

Mouse myoglobin (MYO/MB) ELISA Kit 小鼠肌红蛋白(MYO/MB)检测试剂盒

Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 小鼠糖原合成酶激酶(GSK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumansimilaoRIKENcDNA3110050K21geneELISAKit人类似RIKENcDNA3110050K21基因

通用型鱼滤过性毒菌败血症(ViralHaemorrhagicSepticaemia)试剂盒20次

ELISAKitFⅩⅢ大鼠ⅩⅢ

CD79B重组小鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

35kDa核孔蛋白(NUP35)重组蛋白 Recombinant Nucleoporin 35kDa (NUP35)

EPHA2重组人 EphA2 蛋白 (aa 585-976, His & GST 标签) Protein

DSC2 Protein Human 重组人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

LCN2 Protein Rat 重组大鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

35kDa核孔蛋白(NUP35)重组蛋白 Recombinant Nucleoporin 35kDa (NUP35)

DSC2 Protein Human 重组人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

CD79B重组小鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

LCN2 Protein Rat 重组大鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

EPHA2重组人 EphA2 蛋白 (aa 585-976, His & GST 标签) Protein

小鼠抗卵巢抗体(AOAb)ELISA 试剂盒  试剂盒 组装/原装

Ai thyroid globulin aibody against rat (ATGA/TGAB) ELISA Kit 大鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)检测试剂盒

Humanepidermalkeratin,EKELISAKit 人表皮角蛋白(EK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAngiopoietin4,ANG-4检测试剂盒人血管生成素4(ANG-4)检测试剂盒规格：96T/48T

植物辅酶Q含量比色法定量检测试剂盒20次

IL-1βELISAKit鱼类白介素1β(IL-1β)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠牙龈上皮细胞小鼠骨成型蛋白-2   英文名称：   Bone morphogenetic protein-2   规格：      英文缩写：   BMP-2

小鼠骨成型蛋白-4   英文名称：   Bone morphogenetic protein-4   规格
：      英文缩写
：   BMP-4

小鼠骨成型蛋白受体1A   英文名称：   Bone morphogenetic protein-Receptor 1A   规格
：      英文缩写：   BMP-R1A

小鼠免疫细胞表面抗原分子CD4+   英文名称：   Mouse Cluster of Differeiation 4+   规格：      英文缩写：   CD4+

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h


。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。