實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠牙乳頭分離自牙乳頭組織；牙乳頭細胞來源於外胚間充質 ，具有多向分化潛能 ，是體內分化為成牙本質細胞的前體細胞 ，該細胞在牙發育和牙體牙髓損傷修複過程中起重要作用 。牙乳頭細胞為未分化的間充質細胞 ，有少量微細的膠原纖維分散在細胞外間隙 。在鍾狀期 ，被成釉器凹陷部包圍的外胚間葉組織增多 ，並出現細胞的分化 。在內釉上皮的誘導下 ，牙乳頭外層細胞分化為高柱狀的成牙本質細胞 。這些細胞在切緣或牙尖部為柱狀 ，在牙頸部細胞尚未分化成熟 ，為立方狀 。牙乳頭在牙發育中有重要作用 。現已證明 ，牙乳頭是決定牙形狀的重要因索 。例如 ，將切牙的成釉器與磨牙的牙乳頭重新組合 ，結果形成磨牙 ；與此相反 ，切牙的牙乳頭與磨牙成釉器重新組合 ，結果形成切牙 。牙乳頭還可以誘導非牙源性的口腔上皮形成成釉器 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠牙乳頭采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠牙乳頭經DMP免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠層連蛋白/板層素(LN)檢測試劑盒  ，英文名 ： LN ELISA Kit

Mouse N- acetyl - seryl - aspayl -- lysyl - proline (AcSDK 小鼠N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯(AcSDK

ELISA 小鼠雙鏈DNA(mouse dsDNA)  進口分裝

CLIAKitforLC1(Humanai-livercytosolaibodytype1)ELISAKit人抗肝細胞胞質1型抗體

通用型vero毒素大腸杆菌誌賀氏毒素-1(VTEC-Shigatoxin1)試劑盒20次

ELISAKitBV猴B病毒

THOP1重組小鼠 THOP1 蛋白 Protein

S100鈣結合蛋白(S100)重組蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein (S100)

KLRK1重組人 NKG2D / CD314 蛋白 (aa 78-216, His 標簽) Protein

DSC2 Protein Human 重組人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

防禦素β103B(DEFβ103B)重組蛋白 Recombinant Defensin Beta 103B (DEFB103B)

DSC2 Protein Human 重組人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

FIGF重組小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 Protein

IGFBP1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP1 蛋白

BIRC5重組人 Survivin / BIRC5 / API4 蛋白 Protein

小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human heat shock protein 40 (HSP-40) ELISA Kit 人熱休克蛋白40(HSP-40)檢測試劑盒

HumanEuglobulinLysis,ELELISAKit 人優球蛋白(EL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAngiopoietin1,ANG-1檢測試劑盒人血管生成素1(ANG-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物脯(proline)含量比色法定量檢測試劑盒20次

LHELISAKit魚促黃體激素(LH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠牙乳頭細胞小鼠骨成型蛋白7   英文名稱 ：   Mouse Bone Morphogenetic Protein 7   規格 ：      英文縮寫 ：   BMP7

小鼠B淋巴細胞刺激因子   英文名稱 ：   B lymphocyte stimulator   規格 ：      英文縮寫 ：   BAFF

小鼠凋亡因子BAX   英文名稱 ：   apoptogen BAX   規格 ：      英文縮寫 ：   BAX

小鼠細胞凋亡相關基因BCL-2   英文名稱 ：   Cell appoptosis inhibitory BCL-2   規格 ：      英文縮寫 ：   BCL-2