老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠牙乳头分离自牙乳头组织
；牙乳头细胞来源于外胚间充质
，具有多向分化潜能，是体内分化为成牙本质细胞的前体细胞，该细胞在牙发育和牙体牙髓损伤修复过程中起重要作用
。牙乳头细胞为未分化的间充质细胞，有少量微细的胶原纤维分散在细胞外间隙。在钟状期
，被成釉器凹陷部包围的外胚间叶组织增多，并出现细胞的分化
。在内釉上皮的诱导下
，牙乳头外层细胞分化为高柱状的成牙本质细胞。这些细胞在切缘或牙尖部为柱状，在牙颈部细胞尚未分化成熟，为立方状

。牙乳头在牙发育中有重要作用
。现已证明，牙乳头是决定牙形状的重要因索。例如

，将切牙的成釉器与磨牙的牙乳头重新组合，结果形成磨牙

；与此相反，切牙的牙乳头与磨牙成釉器重新组合
，结果形成切牙
。牙乳头还可以诱导非牙源性的口腔上皮形成成釉器。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠牙乳头采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠牙乳头经DMP免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息

：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠层连蛋白/板层素(LN)检测试剂盒 ，英文名： LN ELISA Kit

Mouse N- acetyl - seryl - aspayl -- lysyl - proline (AcSDK 小鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯(AcSDK

ELISA 小鼠双链DNA(mouse dsDNA)  进口分装

CLIAKitforLC1(Humanai-livercytosolaibodytype1)ELISAKit人抗肝细胞胞质1型抗体

通用型vero毒素大肠杆菌志贺氏毒素-1(VTEC-Shigatoxin1)试剂盒20次

ELISAKitBV猴B病毒

THOP1重组小鼠 THOP1 蛋白 Protein

S100钙结合蛋白(S100)重组蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein (S100)

KLRK1重组人 NKG2D / CD314 蛋白 (aa 78-216, His 标签) Protein

DSC2 Protein Human 重组人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

EPCAM Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

防御素β103B(DEFβ103B)重组蛋白 Recombinant Defensin Beta 103B (DEFB103B)

DSC2 Protein Human 重组人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

FIGF重组小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 Protein

IGFBP1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IGFBP1 蛋白

BIRC5重组人 Survivin / BIRC5 / API4 蛋白 Protein

小鼠抗Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human heat shock protein 40 (HSP-40) ELISA Kit 人热休克蛋白40(HSP-40)检测试剂盒

HumanEuglobulinLysis,ELELISAKit 人优球蛋白(EL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAngiopoietin1,ANG-1检测试剂盒人血管生成素1(ANG-1)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物脯(proline)含量比色法定量检测试剂盒20次

LHELISAKit鱼促黄体激素(LH)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠牙乳头细胞小鼠骨成型蛋白7   英文名称：   Mouse Bone Morphogenetic Protein 7   规格：      英文缩写：   BMP7

小鼠B淋巴细胞刺激因子   英文名称

：   B lymphocyte stimulator   规格
：      英文缩写：   BAFF

小鼠凋亡因子BAX   英文名称：   apoptogen BAX   规格：      英文缩写
：   BAX

小鼠细胞凋亡相关基因BCL-2   英文名称：   Cell appoptosis inhibitory BCL-2   规格
：      英文缩写：   BCL-2