細胞簡介 ：

小鼠牙胚分離自牙胚組織 ；牙胚是牙齒開始發育階段的形態 ，是由牙板向深層的結締組織內伸延 ，在其末端細胞增生，進一步發育成牙胚 。牙胚有三部分組成 ：①成釉器（enamel organ） ，起源於口腔外胚層 ，形成釉質 ；②牙乳頭（dental papilla） ，起源於外胚層間充質 ，形成牙髓和牙本質 ；③牙囊（dental sac） ，起源於外胚層間充質 ，形成牙骨質 、牙周膜和固有牙槽骨 。牙胚的發生是口腔上皮和外胚間充質相互作用的結果 。在胚胎的第5周 ，覆蓋在原口腔的上皮由兩層細胞組成 ，外層是扁平上皮細胞 ，內層為矮柱狀的基底細胞 。在未來的牙槽突區 ，深層的外胚層間充組織誘導上皮增生 ，開始僅在上下頜弓的特定點上 ，上皮局部增生 ，很快增厚的上皮相互連接 ，依照頜骨的外形形成一馬蹄形上皮帶 ，稱為原發性上皮帶 。在胚胎的第7周 ，這一上皮帶繼續向深層生長 ，並分裂為兩個 ：向頰（唇）方向生長的上皮板稱前庭板 ，位於舌（齶）側的上皮板稱為牙板（dental lamina） 。在胚胎的第8-10周 ，前庭板繼續向深層生長 ，與發育的牙槽脊分開 ，前庭板表麵上皮變性 ，形成口腔前庭溝 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠牙胚采用膠原酶消化法製備而來製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠牙胚經檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：梭形 、多角形

傳代特性 ：可傳2-3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠牙胚體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠層粘蛋白α1(LAMA1)檢測試劑盒  ，英文名 ： LAMA1 ELISA Kit

Mouse N- acetyl beta -D- Glucosaminidase (NAG) ELISA Kit 小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)檢測試劑盒

ELISA 小鼠(mouse Cytochrome C)  進口分裝

CLIAKitforLCA/CD45(Humanleukocytecommonaigen)ELISAKit人白細胞共同抗原

通用型RNA酶保護法檢測試劑盒5次

ELISAKitE-Selectin/CD62E猴E選擇素

ENSA重組人 ENSA / Endosulfine alpha 蛋白 Protein

SOD2 (superoxide-dimutase-2 0.5mlSOD2 (superoxide-dimutase-2) 超氧化物歧化酶2抗原

DDR1重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 Protein

DRAXIN Protein Human 重組人 DRAXIN 蛋白

PDGFRA Protein Human 重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白

SOD2 (superoxide-dimutase-2 0.5mlSOD2 (superoxide-dimutase-2) 超氧化物歧化酶2抗原

DRAXIN Protein Human 重組人 DRAXIN 蛋白

ENSA重組人 ENSA / Endosulfine alpha 蛋白 Protein

PDGFRA Protein Human 重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白

DDR1重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 Protein

小鼠抗受體(A)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human heat shock protein 27 (HSP-27) ELISA Kit 人熱休克蛋白27(HSP-27)檢測試劑盒

Humanfreehaemoglobin,f-HbELISAKit 人遊離血紅蛋白(f-Hb)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAngiogenin,ANG檢測試劑盒人血管生長素(ANG)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物非蛋白/遊離巰基含量熒光定量檢測試劑盒20次

MacrobrachiumrosenbergiiNodavirus,MrNVELISAKit羅氏沼蝦諾達病毒(MrNV)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠牙胚細胞小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠骨保護素配體(OPGL)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。