實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠微血管周分離自微血管組織 ；周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞 ，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內皮細胞的細胞 ，可以收縮 。周細胞嵌入毛細血管內皮細胞的基膜中 ，通過物理接觸和旁分泌信號與內皮細胞進行細胞通訊 ，監視和穩定內皮細胞的成熟過程 。此外 ，周細胞還具有調控毛細血管血流量 、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用 ，其多功能性是目前研究的熱點之一 ，所以對血管周細胞的生物學特征 、標記物 、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料 。周細胞產生手指狀的外延以調控毛細血管的血流量 。周細胞和內皮細胞之間共同擁有一個基膜 ，基膜上有多種細胞連接 ，包括多種整合素 、神經鈣黏素 、纖連蛋白以及接合素 。它還參與毛細血管直徑的雙向調控 ；毛細血管受損時 ，周細胞還可增殖 ，分化為內皮細胞和成纖維細胞 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠血管周采用膠原酶-聯合消化法及不鏽鋼網篩過濾法結合密度梯度離心法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠微血管周經alpha-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠Agoi相關蛋白(AGRP)檢測試劑盒  ，英文名 ： AGRP ELISA Kit

Mouse osteopoin (OPN) ELISA Kit 小鼠骨橋素(OPN)檢測試劑盒

Mousenuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit 小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumahrombopoietin,TPOELISAkit人血小板生成素

通用型羊弓形體剛地弓形蟲(Toxotest;Toxoplasmagondii)試劑盒20次

ELISAKitHSP47大鼠熱休克蛋白47

ERBB3重組恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白 Protein

Nanog fragment 幹細胞關鍵蛋白(多肽 0.5mgNanog fragment 幹細胞關鍵蛋白(多肽)

CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

DDR2 Protein Human 重組人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

CSNK2A1 Protein Mouse 重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白

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CA4重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 Protein

小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 大鼠巨噬細胞症蛋白1α(MIP-1α/CCL3)檢測試劑盒

Humanheparinsulphateprotoglycans,HSPGELISAKit 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanalkalinephosphatase,ALP檢測試劑盒人堿性0酸酶(ALP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物V型氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Mouse5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit小鼠5羥色胺(5-HT)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠微血管周細胞小鼠環0酸鳥苷   英文名稱 ：   cyclic adenosine monophosphate   規格 ：      英文縮寫 ：   cGMP

小鼠睫狀神經營養因子   英文名稱 ：   ciliary neuroophic factor   規格 ：      英文縮寫 ：   CF

白細胞分化抗原14   英文名稱 ：   cluster of differeiation aigen 14   規格 ：      英文縮寫 ：   CD14

可溶性細胞表麵分化抗原40配體   英文名稱 ：   Soluble Cluster of differeiation aigen 40 ligand   規格 ：      英文縮寫 ：   sCD40L