細胞簡介 ：

小鼠外周血中性粒分離自外周血 ；外周血是除骨髓之外的血液 ，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血幹細胞釋放到血液中 ，再在從血液中提取分離得到造血幹細胞 ，老哥俱樂部把這樣得到的幹細胞稱為外周血幹細胞 ，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念 。白細胞是一類無色 、球形 、有核的血細胞。白細胞不是一個均一的細胞群 ，根據其形態 、功能和來源部位可以分為三大類 ：粒細胞 、單核細胞和淋巴細胞 ，其中粒細胞又可根據胞質中顆粒的染色性質不同 ，分為中性粒細胞、嗜酸粒細胞和嗜堿粒細胞三種 。中性粒細胞是在瑞氏（Wright）染色血塗片中 ，胞質呈無色或極淺的淡紅色 ，有許多彌散分布的細小的（0.2～0.4微米）淺紅或淺紫色的顆粒 。細胞核呈杆狀或2～5分葉狀 ，葉與葉間有細絲相連 。中性粒細胞具趨化作用 、吞噬作用和殺菌作用 。中性粒細胞來源於骨髓 ，具有分葉形或杆狀的核 ，胞漿內含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細顆粒 。這些顆粒多是溶酶體 ，內含髓過氧化酶 、 、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類 ，與細胞的吞噬和消化功能有關 。中性粒細胞在血液的非特異性免疫中起著十分重要的作用 ，它處於機體抵禦微生物病原體 ，特別是在化膿性細菌入侵的線 ，具有很強的吞噬活性 ，可吞噬細菌 、衰老的紅細胞 、抗原一抗體複合物和壞死的細胞等 。中性粒細胞內含有大量溶酶體酶 ，因此能將吞噬入細胞內的細菌和組織碎片分解 。當中性粒細胞吞噬數十個細菌後 ，自身發生解體 ，所釋出的各種溶酶體酶類能溶解周圍組織而形成膿液 。中性粒細胞是人體內壽命短的細胞 ，一般體外培養12-24h內活性穩定 ，48h活性下降 ，96h基本死亡 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠外周血中性粒采用取外周血 、通過密度梯度離心法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠外周血中性粒經瑞氏染色法 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 圓形

傳代特性 不增殖 ；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95%；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

血管內皮抑素 (Endostatin)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

內皮素 -1(Endothelin-1)   作用：   ELISA   規格 ：      進口分裝

內啡肽 - b (Endorphin- b )   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

內皮細胞合酶 (eNOS)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠遊離狀腺原酸(Free-T3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai histone aibody of ai -DNA (H2A-H2B) / two mer -DNA aibody ELISA Kit 人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體試劑盒

Humanepithelialspecificaigen,ESAELISAKit 人上皮特異性抗原(ESA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor8-iso-PG(Human8-isoprostaglandin)ELISAKit人8異前列腺素

異丁甲基細胞脂肪誘導生成比色法定量試劑盒20次

MouseMotilin,MTLELISAKit小鼠胃動素(MTL)試劑盒規格 ：96T/48T

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Zhejiang/ DTID-ZJU10/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原 0.5mgPAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原

LRP1重組人 LRP1 / A2MR / CD91 蛋白 (aa 786-1165) Protein

CCL23 Protein Human 重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白

ALPL Protein Human 重組人 Alkaline Phosphatase / ALPL 蛋白

PAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原 0.5mgPAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原

CCL23 Protein Human 重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Zhejiang/ DTID-ZJU10/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

ALPL Protein Human 重組人 Alkaline Phosphatase / ALPL 蛋白

LRP1重組人 LRP1 / A2MR / CD91 蛋白 (aa 786-1165) Protein

小鼠外周血中性粒細胞大鼠低氧誘導因子1α(HIF-1α)試劑盒  ，英文名 ： HIF-1α ELISA Kit

Porcine plasminogen activator inhibitor (PAI) ELISA Kit 豬纖溶酶原激活物抑製因子(PAI)試劑盒

廣州管圓線蟲核酸試劑盒(熒光PCR法) 48T

CLIAKitforLRP-6(Humanlow-densitylipoprotein-receptor-relatedprotein)ELISAKit人低密度脂蛋白受體相關蛋白6

通用HRP酶聯檢測封閉溶液100毫升

ELISAKitsICAM-1雞可溶性細胞間粘附分子1

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。