實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠神經少突膠質前體分離自腦皮層組織 ；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分 ，它是神經元胞體集中的地方 。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質 。少突膠質細胞分布於中樞神經係統 ，在銀浸染標本中 ，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小 ，其突起也較小而少 ，呈珠狀 ，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞 。少突膠質細胞（oligodendrocyte）是中樞神經係統（CNS）的成髓鞘神經膠質細胞 ，其發育要經曆少突膠質細胞祖細胞 、前少突膠質細胞祖細胞 、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段 。有學者將少突膠質細胞按其發育程度和形態分為三型 。但是 ，細胞發育是一個連續的過程 ，其形態 、表達產物和功能的演變沒有嚴格的界限 ，因此 ，其分類是相對的 。這三型分別為 ：Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell） 。細胞呈圓形 ，表麵光滑 ，直徑約3μm ，體外混合培養時成簇生長在星形膠質表麵 ，具有很強的分裂增殖潛力 ，表達GM1 、波形蛋白和多唾液酸—神經粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule ，PSA-NCAM）等 。Ⅱ型少突膠質細胞胞體常有雙極或三極突起 ，極少數為單極突起 ，直徑約7μm ，有一定的分裂增殖能力 。體外培養時為雙潛能細胞 ，既可分化為少突膠質細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質 ，故又稱為少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell ，O2A） 。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產生GQ的抗體） ，故常用A2B5抗體標記O2A 。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力 ，為分裂終期細胞 。直徑約10μm 。根據其形成髓鞘的能力 ，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質細胞 。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起 ，表麵還殘留有A2B5標記物 ，同時也表達O1-O4抗原 ，無形成髓鞘的能力 。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網 ，大量表達半乳糖腦苷脂（galactocerebro side ，GC） 、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein ，PLP） 、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein ，MBP）等 ，有對軸突髓鞘化的能力 。體外培養的少突膠質細胞前體細胞（簡稱少突膠質細胞前體細胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質細胞 ，前兩者具有增殖能力 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠神經少突膠質采用消化 、混合細胞營養缺失培養 、搖床振蕩結合差速貼壁法並通過專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×105cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠神經少突膠質前體經A2B5免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 Supplement 、PDGF 、bFGF 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2天半量換液1次

生長特性 貼壁

細胞形態 雙極 、多極形

傳代特性 不傳代 ，不增值，存活1-2周

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠載脂蛋白E(APOE)檢測試劑盒  ，英文名 ： APOE ELISA Kit

Mouse phospho protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)檢測試劑盒

MouseIerleukin9,IL-9ELISAKIT 小鼠白介素9(IL-9)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanfractalkine/CX3CL1ELISAKit人趨化因子

細胞/組織多聚賴載玻片製備試劑盒5次(50至100片)

ELISAKitMMP-9大鼠基質金屬蛋白酶9/明膠酶B

PREP重組小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

鈣非依賴性0脂酶A2(iPLA2)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

MAP1LC3B重組人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽)

CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

T-細胞免疫調節因子1(TCIRG1)重組蛋白 Recombinant T-Cell, Immune Regulator 1 (TCIRG1)

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標簽)

AARS重組小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白 Protein

EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

CXCL11重組人 I-TAC / CXCL11 蛋白 Protein

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human prostacycline (PGI) ELISA Kit 人前列環素(PGI)檢測試劑盒

Humanα-Smoothmuscleactin,α-SMAELISAKit 人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAdenovirusIgG,ADV-IgG檢測試劑盒人腺病毒IgG(ADV-IgG)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植酸待測樣品處理試劑盒20次

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISAKit小鼠小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠神經少突膠質前體細胞小鼠堿性0酸酶   英文名稱 ：   Mouse Alkaline phosphatase   規格 ：      英文縮寫 ：   ALP

小鼠同種異體移植性因子1   英文名稱 ：   Mouse Allograft Inflamuatory Factor 1   規格 ：      英文縮寫 ：   AIF-1

小鼠血管生成素樣蛋白2   英文名稱 ：   Mouse Angiopoietin like protein 2   規格 ：      英文縮寫 ：   ANGPTL2

小鼠血管生成素樣蛋白4   英文名稱 ：   Mouse Angiopoietin Like Protein 4   規格 ：      英文縮寫 ：   ANGPTL4