老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠神经少突胶质前体分离自脑皮层组织

；大脑分左右两个半球
，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分
，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质
。少突胶质细胞分布于中枢神经系统，在银浸染标本中
，少突胶质细胞比星状胶质细胞小，其突起也较小而少
，呈珠状，故被称为少突胶质细胞或寡突胶质细胞。少突胶质细胞（oligodendrocyte）是中枢神经系统（CNS）的成髓鞘神经胶质细胞
，其发育要经历少突胶质细胞祖细胞
、前少突胶质细胞祖细胞、未成熟和成熟少突胶质细胞等阶段。有学者将少突胶质细胞按其发育程度和形态分为三型。但是
，细胞发育是一个连续的过程
，其形态、表达产物和功能的演变没有严格的界限，因此
，其分类是相对的。这三型分别为：Ⅰ型少突胶质细胞又称前O2A（pre-O2A progenitor cell）。细胞呈圆形，表面光滑，直径约3μm，体外混合培养时成簇生长在星形胶质表面，具有很强的分裂增殖潜力，表达GM1、波形蛋白和多唾液酸—神经粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule
，PSA-NCAM）等
。Ⅱ型少突胶质细胞胞体常有双极或三极突起，极少数为单极突起
，直径约7μm，有一定的分裂增殖能力
。体外培养时为双潜能细胞

，既可分化为少突胶质细胞又可分化为Ⅱ型星形胶质，故又称为少突胶质细胞-Ⅱ型星形胶质祖细胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表达GM1和波形蛋白外还表达GD3和GQ（淋巴杂交瘤株A2B5产生GQ的抗体），故常用A2B5抗体标记O2A
。Ⅲ型少突胶质细胞不再具有分裂增殖能力，为分裂终期细胞
。直径约10μm
。根据其形成髓鞘的能力，又分为不成熟的和成熟的两类少突胶质细胞。不成熟的OL胞体常伸出4～5条较粗大突起
，表面还残留有A2B5标记物，同时也表达O1-O4抗原
，无形成髓鞘的能力。成熟的少突胶质细胞突起有如蜘蛛网，大量表达半乳糖脑苷脂（galactocerebro side
，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein
，PLP）、髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein
，MBP）等，有对轴突髓鞘化的能力
。体外培养的少突胶质细胞前体细胞（简称少突胶质细胞前体细胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突胶质细胞
，前两者具有增殖能力
。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠神经少突胶质采用消化、混合细胞营养缺失培养、摇床振荡结合差速贴壁法并通过专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×105cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠神经少突胶质前体经A2B5免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2天半量换液1次

生长特性 贴壁

细胞形态 双极
、多极形

传代特性 不传代，不增值，存活1-2周

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠载脂蛋白E(APOE)检测试剂盒 ，英文名
： APOE ELISA Kit

Mouse phospho protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)检测试剂盒

MouseIerleukin9,IL-9ELISAKIT 小鼠白介素9(IL-9)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanfractalkine/CX3CL1ELISAKit人趋化因子

细胞/组织多聚赖载玻片制备试剂盒5次(50至100片)

ELISAKitMMP-9大鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B

PREP重组小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

钙非依赖性0脂酶A2(iPLA2)重组蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

MAP1LC3B重组人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein

DAPK3 Protein Human 重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)

CXCL13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

T-细胞免疫调节因子1(TCIRG1)重组蛋白 Recombinant T-Cell, Immune Regulator 1 (TCIRG1)

DAPK3 Protein Human 重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)

AARS重组小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白 Protein

EPCAM Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

CXCL11重组人 I-TAC / CXCL11 蛋白 Protein

小鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human prostacycline (PGI) ELISA Kit 人前列环素(PGI)检测试剂盒

Humanα-Smoothmuscleactin,α-SMAELISAKit 人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAdenovirusIgG,ADV-IgG检测试剂盒人腺病毒IgG(ADV-IgG)检测试剂盒规格：96T/48T

植酸待测样品处理试剂盒20次

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2ELISAKit小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠神经少突胶质前体细胞小鼠碱性0酸酶   英文名称：   Mouse Alkaline phosphatase   规格：      英文缩写：   ALP

小鼠同种异体移植性因子1   英文名称
：   Mouse Allograft Inflamuatory Factor 1   规格：      英文缩写：   AIF-1

小鼠血管生成素样蛋白2   英文名称：   Mouse Angiopoietin like protein 2   规格

：      英文缩写：   ANGPTL2

小鼠血管生成素样蛋白4   英文名称：   Mouse Angiopoietin Like Protein 4   规格：      英文缩写
：   ANGPTL4