老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠神经干分离自脑皮层组织
；大脑分左右两个半球
，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分
，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面
，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）、内侧面和底面（占2/3的面积）；半球表面有很多深浅不等的沟或裂
，沟或裂之间的隆起叫回
，它们大大增加了大脑的表面积；大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂
、顶枕裂和中央沟。由于三沟裂之界隔
，使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶
、枕叶四大部分

。神经干细胞具有分化为神经神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，能自我更新，并足以提供大量脑组织细胞的细胞群。神经干细胞是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。需要强调的是，在脑脊髓等所有神经组织中，不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同，分布也不同。神经干细胞作为干细胞的一种，它具有其它所有干细胞的基本特征：具有自我维持和自我更新能力
，具有多种分化潜能
，具有分化为本系统大部分类型细胞的能力，这种自我更新和分化潜能可以维持相当长的时间甚至终生
，对损伤和疾病具有反应能力
。神经干细胞在疾病、损伤状态下具有增殖
、迁移，并向神经细胞
、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力
，已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点，体外建立稳定的神经干细胞培养模型是其基础和临床应用的前提。神经干细胞在培养3-4d后
，可形成神经球
，神经球在培养基中呈悬浮生长，予以更换半量培基，1周后用吸管轻柔吹打球形克隆成为小的神经球和单细胞悬液，将部分细胞接种到新的培养瓶中，2×105个细胞/瓶，每7-10d传代1次，每隔3d离心更换半量培养基1次，培养条件不变
。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠神经干采用消化后差速贴壁，结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来，总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠神经干经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 球形

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%，Accutase

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2

，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠载脂蛋白B100(APOB100)检测试剂盒 
，英文名： APOB100 ELISA Kit

Mouse phospholipase A2 (PL-A2) ELISA Kit 小鼠0脂酶A2(PL-A2)检测试剂盒

MouseLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISAkit 小鼠白血病抑制因子(LIF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanFibrinogen,FbgELISAKit人血纤蛋白原

细胞/组织高质化溶酶体分离试剂盒10次

ELISAKitMMP-4大鼠基质金属蛋白酶4

CD6重组小鼠 CD6 / TP120 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD72分子(CD72)重组蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 72 (CD72)

AZGP1重组人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 蛋白 Protein

DAPK3 Protein Human 重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)

CST3 Protein Rat 重组大鼠 Cystatin C / CST3 蛋白

钙非依赖性0脂酶A2(iPLA2)重组蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

DAPK3 Protein Human 重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)

PREP重组小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

CXCL13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

MAP1LC3B重组人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein

小鼠0酸化基末端蛋白激酶(P-JNK)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human prostaglandin D syhase (PGDS) ELISA Kit 人前列腺素D合成酶(PGDS)检测试剂盒

HumanBcl-2associatedXprotein,BaxELISAKit 人Bcl-2相关X蛋白(BAX)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAdenovirusIgM,ADV-IgM检测试剂盒人腺病毒IgM(ADV-IgM)检测试剂盒规格：96T/48T

植物3-0酸甘油脱氢酶(GAPDH)活性酶动力比色法定量检测试剂盒20次

Mousealpha-fetoproteinLensculinarisaggliin1,AFP-L1ELISAKit小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠神经干细胞小鼠碱性0酸酶(ALP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。