實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠膀胱上皮分離自膀胱組織 ；膀胱是一個儲尿器官 ，在哺乳類動物 ，它是由平滑肌組成的一個囊形結構 ，位於骨盆內 ，其後端開口與尿道相通 。膀胱與尿道的交界處有括約肌 ，可以控製尿液的排出 。膀胱壁由三層組織組成 ，由內向外為黏膜層 、肌層和外膜 。肌層由平滑肌纖維構成 ，稱為逼尿肌 ，逼尿肌收縮 ，可使膀胱內壓升高 ，壓迫尿液由尿道排出 。在膀胱與尿道交界處有較厚的環形肌 ，形成尿道內括約肌 。在括約肌收縮能關閉尿道內口 ，防止尿液自膀胱漏出 。膀胱壁分為三層 ：即漿膜層（蜂窩脂肪組織） 、肌肉層（逼尿肌 、膀胱三角區肌）和黏膜層（極薄的一層移行上皮組織） 。其主要作用有 ：①組成過濾屏障內壁的重要部分；②在炎症和致血栓物質的刺激合成必要的生物活性分子 ；③受損後影響係膜細胞和上皮細胞 ，進而影響腎髒病變 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠膀胱移行上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠膀胱移行上皮經Cytokeratin-AE1/AE3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠內皮素2(EDN2)檢測試劑盒  ，英文名 ： EDN2 ELISA Kit

Mouse platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit 小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)檢測試劑盒

RatGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 大鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGIP(Humangasicinhibitorypolypeptide)ELISAKit人胃抑素

細胞脯肽酶(prolidase;PLD)紫外比色法定量檢測試劑盒20次

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

SLAMF8重組小鼠 SLAMF8 / BLAME 蛋白 Protein

Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase 0.5mgAlpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase) α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原

AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標簽)

BST1 Protein Rat 重組大鼠 CD157 / BST1 蛋白

胞外5'-核苷酸酶(NT5E)重組蛋白 Recombinant 5'-Nucleotidase, Ecto (NT5E)

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標簽)

ST6GALNAC2重組小鼠 STHM / ST6GALNAC2 蛋白 Protein

CD53 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, Fc 標簽)

EBAG9重組人 RCAS1 / EBAG9 蛋白 Protein

小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human glucokinase regulatory protein (GKRP) ELISA Kit 人葡萄糖激酶調節蛋白(GKRP)檢測試劑盒

HumanhepatitisBvirusXieractingprotein,HBXIPELISAKit 人乙型肝病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫa檢測試劑盒人活化Ⅻ(FⅫa)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

脂肪氧化酶(lipoxygenase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

MouseangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠膀胱移行上皮細胞小鼠巨噬細胞移動抑製因子(MIF)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細胞性蛋白5(MIP-5)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細胞性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝