細胞簡介 ：

小鼠膀胱平滑肌分離自膀胱組織 ；膀胱是主要由平滑肌細胞組成的中空器官 ，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲存和排出尿液 。膀胱平滑肌細胞表型的調控和可誘導一氧化氮合酶的表達與多種病理狀況有關 ，包括膀胱功能障礙 。研究表明 ，組織缺氧抑製膀胱平滑肌細胞的增殖 ，膀胱平滑肌細胞的分化依賴於膀胱上皮細胞釋放的因子 。膀胱平滑肌細胞外基質的分泌表型可通過細胞所經曆的機械變形頻率而改變 。平滑肌是許多疾病中的共同路徑 ，因此 ，了解在疾病發生及持續過程中平滑肌怎樣變化 ，這是治療方法取得進展的重要一步 。膀胱壁由三層組織組成 ，由內而外為黏膜層 、肌層和外膜 。其中 ，肌層主要由平滑肌構成 。膀胱平滑肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展 ，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形 、三角形或扇形 ，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合 ，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時 ，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。體外培養膀胱平滑肌細胞不僅為組織工程膀胱 、尿道提供種植細胞的必要手段 ，也是研究平滑肌瘤的基礎與前提 。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠膀胱平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠膀胱平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠孕受體試劑盒   小鼠孕受體試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠孕受體試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠孕受體試劑盒 、小鼠孕受體試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠孕激素試劑盒   小鼠孕激素試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠孕激素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠孕激素試劑盒 、小鼠孕激素試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠誘導型NO合酶試劑盒   小鼠誘導型NO合酶試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠誘導型NO合酶試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠誘導型NO合酶試劑盒 、小鼠誘導型NO合酶試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月。

小鼠遊離狀腺原酸試劑盒   小鼠遊離狀腺原酸試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠遊離狀腺原酸試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠遊離狀腺原酸試劑盒 、小鼠遊離狀腺原酸試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat apoptosis inducing factor (AIF) ELISA Kit 大鼠凋亡誘導因子(AIF)試劑盒

Humanα-L-iduronidase,IDUAELISAKit 人αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor(MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199)ELISAKit小鼠胃腸癌標誌物CA199

飲料乙酸激酶法定量試劑盒20次

MouseIerleukin6,IL-6ELISAKit小鼠白介素6(IL-6)試劑盒規格 ：96T/48T

IL13RA2重組狗 IL13RA2 / IL13R 蛋白 Protein

NR1/NMDAR1 穀受體1 0.5mgNR1/NMDAR1 穀受體1

HAVCR1重組人 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 Protein

CD300A Protein Human 重組人 CD300A 蛋白 (Fc 標簽)

GFRA3 Protein Mouse 重組小鼠 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白

NR1/NMDAR1 穀受體1 0.5mgNR1/NMDAR1 穀受體1

CD300A Protein Human 重組人 CD300A 蛋白 (Fc 標簽)

IL13RA2重組狗 IL13RA2 / IL13R 蛋白 Protein

GFRA3 Protein Mouse 重組小鼠 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白

HAVCR1重組人 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 Protein

小鼠膀胱平滑肌細胞大鼠鈣衛蛋白(CALP)試劑盒  ，英文名 ： CALP ELISA Kit

Porcine follicle stimulating hormone (FSH) ELISA Kit 豬促卵泡素(FSH)試劑盒

轉基因植物NOS基因核酸試劑盒 48T

CLIAKitforMCP-4/CCL13ELISAKit大鼠單核細胞趨化蛋白4

體液B1高效液相色譜法定量試劑盒20次

ELISAKitIL-1綿羊白介素1

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。