實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠腦動脈血管平滑肌分離自腦動脈組織 ；腦動脈有成對的頸內動脈和椎動脈互相銜接成動脈循環 ；靜脈係多不與同名動脈拌行 ，所收集的靜脈血先進入靜脈竇再匯入頸內靜脈 ；各級靜脈都沒有瓣膜 。它包括腦的動脈係統和腦的靜脈係統 。腦動脈平滑肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展 ，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形 、三角形或扇形 ，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合 ，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起 ，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時 ，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠腦動脈平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠腦動脈血管平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

中文名稱   方法   規格

小鼠多巴胺(DA)ELISAKit   ELISA. 

小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISAKit   ELISA. 

小鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISAKit   ELISA.

豬補體片段3b受體(C3bR)ELISA 試劑盒

Human Legionella aibody IgM (LP Ab-IgM) ELISA Kit 人軍團菌抗體IgM(LP Ab-IgM )試劑盒

PorcineGlucoseanspoer2,GL2ELISAKit 豬葡萄糖轉運蛋白2(GL2)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforALK(Humananapasticlymphomakinase)ELISAKit人間變性淋巴瘤激酶

血液卵0脂乙酰轉移酶(LCAT)活性熒光定量試劑盒20次

MousevonWillebrandFactor,vWFELISAKit小鼠血管性血友病因子/瑞斯托輔因子(vWF)試劑盒

IL13重組小鼠 IL13 / ALRH 蛋白 Protein

轉乙酰基酶(DLAT)重組蛋白 Recombinant Dihydrolipoyl Transacetylase (DLAT)

NRN1L重組人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 蛋白  Protein

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標簽)

CD38 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 SCARB3 蛋白

肌肌酸激酶(CKM)天然蛋白 Native Creatine Kinase, Muscle (CKM)

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標簽)

PDGFC重組小鼠 PDGF-C / SCDGF 蛋白  Protein

TEK Protein Rat 重組大鼠 Tie2 / TEK 蛋白

SLITRK6重組人 SLITRK6 蛋白 (His 標簽) Protein

小鼠腦動脈血管平滑肌細胞大鼠肝配蛋白B受體3(EPHB3)試劑盒 ，英文名 ： EPHB3 ELISA Kit

Rat alpha L fucosidase (AFU) ELISA Kit 大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)試劑盒

RatClusterofdiffereiation30,CD30ELISAKit 大鼠白細胞分化抗原30(CD30)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforE2ELISAKIT魚雌二醇

細胞培養汙染性支原體M.hominis鑒定16SrDNAPCR擴增試劑盒20次

Ratinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit大鼠誘導型合成酶(iNOS)試劑盒