實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介：

小鼠肝動脈平滑肌分離自肝動脈組織 ；在胚胎期 ，肝髒有3條動脈供血 ，分別來源於胃左動脈 、腹腔動脈和腸係膜上動脈 ，這3條動脈分別的不同部位 。出生後 ，一般保留一條動脈 ，大部分為起源於腹腔動脈的動脈 ，由其分出左 、右肝動脈供應左 、右半肝 。偶爾也可見起源於胃左動脈的動脈或起源於腸係膜上動脈的動脈 。但也有2條動脈並存的情況 ，如起源於腹腔動脈和起源於胃左動脈（25%） ，起源於腹腔動脈和起源於腸係臘上動脈（10%） ，而起源於胃左動脈和起源於腸係膜上動脈的2條動脈同時存在的情況比較少見 。此外 ，還有5%像胚胎期一樣 ，3條動脈同時存在 。這種起源於腹腔動脈以外的肝動脈稱為迷走肝動脈 ，如果肝髒沒有起源於腹腔動脈的動脈供血時 ，此種異位起源的肝動脈稱替代動脈 ，如果在常見肝動脈類型外 ，還有一支這種異位起始的動脈的一部分血流 ，這種肝動脈稱副肝動脈 。肝動脈平滑肌細胞是肝動脈的重要結構細胞之一 ，在機體的正常生理過程中發揮著重要作用 。肝動脈平滑肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展 ，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形 、三角形或扇形 ，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合 ，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起 ，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時 ，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。血管平滑肌細胞的加速生長潛能是血管疾病進展的關鍵因素 ，新研究表明血管平滑肌細胞表達的ICAM-1和VCAM-1能促進血管壁的炎症反應 ，並且與血管疾病的發展及穩定性有關 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠肝動脈平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠肝動脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠脂質運載蛋白1(LCN1)檢測試劑盒  ，英文名 ： LCN1 ELISA Kit

Mouse soluble myosin heavy chain 2 (sMHC-2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)檢測試劑盒

MouseFractalkine,FKELISAKit 小鼠趨化因子(FK)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanHomocysteine(Hcy)ELISAKit人血漿同型半胱

B2比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitKAF大鼠角化細胞內分泌因子

PDGFRA重組大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein

CYP450(Cytochrome P450 monooxygenase 0.5mgCYP450(Cytochrome P450 monooxygenase) 細胞色素P450單氧化酶(多肽抗原)

CCL21重組人 CCL21 / 6Ckine 蛋白 Protein

CSF1R Protein Human 重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 標簽)

SERPINA11 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA11 蛋白

CYP450(Cytochrome P450 monooxygenase 0.5mgCYP450(Cytochrome P450 monooxygenase) 細胞色素P450單氧化酶(多肽抗原)

CSF1R Protein Human 重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 標簽)

PDGFRA重組大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein

SERPINA11 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA11 蛋白

CCL21重組人 CCL21 / 6Ckine 蛋白 Protein

小鼠葡萄糖激酶(GCK)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human thrombin thrombomodulin complex regulation (T-TM) ELISA Kit 人血栓調節蛋白複合物(T-TM)檢測試劑盒

HumanCollagen-likeBioproteinⅡ,HCBⅡELISAKit 人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Heneggphosvitinphosphopeptides,PPP檢測試劑盒雞蛋卵黃高0蛋酸肽(PPP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞線粒體DNA萃取試劑盒10/20次

MouseBeta-Endorphieceptor,β-EPRELISAKit小鼠β內啡肽受體(β-EPR)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠肝動脈平滑肌細胞小鼠淋巴球性脈絡叢腦膜病毒抗體（LCM-Ab）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠酪蛋白酶檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝