老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠Ⅱ型肺泡上皮分离自肺组织；肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡
，即为肺泡。小肺泡细胞，又称I型肺泡细胞，厚约0.1微米
，基底部是基底膜
，无增殖能力。大肺泡细胞，又称Ⅱ型肺泡细胞
，分泌表面活性物质（二棕榈酰）

，以降低肺泡表面张力。Ⅱ型肺泡细胞位于Ⅰ型肺泡细胞之间

，数量较Ⅰ型肺泡细胞多，但覆盖面积比Ⅰ型肺泡细胞小。细胞立方形或圆形,顶端突入肺泡腔。细胞核圆形，胞质着色浅
、呈泡沫状
。电镜下
，细胞游离而有少量微绒毛，胞质内富含线粒体和溶酶体
，有较发达的粗面内质网和高尔基复合体。核上方有较多的分泌颗粒，电子密度高、大小不等，直径约0.1-1.0μm颗粒内含有平行排列的板层状结构，称为嗜饿性板层小体
。小体内的主要成分为磷脂
，以二棕榈酰为主，此外还有糖胺多糖及蛋白质等。颗粒内物质释放出来后
，在肺泡表面形成一层粘液层，称为表面活性物质（surfactant）
。表面活性物质有降低肺泡表面张力、稳定肺泡大小的作用
。呼气时肺泡缩小，表面活性物质密度增加
，表面张力降低，防止肺泡过度塌陷；吸气时肺泡扩张，表面活性物质密度减小，肺泡回缩力加大


，可防止肺泡过度膨胀
。表面活性物质的缺乏或变性均可引起肺不张，过度通气可造成表面活性物质缺乏；吸入毒气可直接破坏表面活性物质

。Ⅱ型肺泡细胞有分裂
、增殖并分化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能，故具有修复受损伤上皮的作用
。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠Ⅱ型肺泡上皮采用弹性蛋白酶灌注消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠Ⅱ型肺泡上皮经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

猪生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISAKit   ELISA. 

中文名称   方法   规格

猪(Dex)ELISAKit   ELISA. 

猪D二聚体(D2D)ELISAKit   ELISA.

猪生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA 试剂盒

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GuineapigleukoieneD4,LT-D4ELISAKit 豚鼠白三烯D4(LTD4)试剂盒 进口分装

CLIAKitforANG-2(RabbitAngiopoietin2)ELISAKit兔血管生成素2

血液多胺氧化酶(PAO)活性比色法定量试剂盒20次

PorcineEpinephrine/Adrenaline,EPIELISAKit猪(EPI)试剂盒

HA重组甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

RAP1A (RAS-related protein-1a precursor 0.2mlRAP1A (RAS-related protein-1a precursor) Rap1A抗原

ICAM2重组人 ICAM-2 / CD102 蛋白 (His 标签) Protein

B3GAT3 Protein Human 重组人 B3GAT3 / GLCATI 蛋白 (His 标签)

AHSG Protein Human 重组人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 蛋白 (His 标签)

RAP1A (RAS-related protein-1a precursor 0.2mlRAP1A (RAS-related protein-1a precursor) Rap1A抗原

B3GAT3 Protein Human 重组人 B3GAT3 / GLCATI 蛋白 (His 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

AHSG Protein Human 重组人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 蛋白 (His 标签)

ICAM2重组人 ICAM-2 / CD102 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞大鼠磺基转移酶(SULT1A1)试剂盒 ，英文名： SULT1A1 ELISA Kit

Rabbit osteopoin (OPN) ELISA Kit 兔骨桥素(OPN)试剂盒

脑膜奈瑟菌A群(NM-A)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMouseMucin-7,MUC7ELISAKit小鼠粘蛋白/粘液素7

体液胱(cystine)含量比色法定量试剂盒20次

ELISAKit28SrRNP人28S抗核糖体抗体

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。