細胞簡介 ：

小鼠Ⅱ型肺泡上皮分離自肺組織 ；肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡 。肺中的支氣管經多次反複分枝成無數細支氣管 ，它們的末端膨大成囊 ，囊的四周有很多突出的小囊泡 ，即為肺泡 。小肺泡細胞 ，又稱I型肺泡細胞 ，厚約0.1微米 ，基底部是基底膜 ，無增殖能力 。大肺泡細胞 ，又稱Ⅱ型肺泡細胞 ，分泌表麵活性物質（二棕櫚酰） ，以降低肺泡表麵張力 。Ⅱ型肺泡細胞位於Ⅰ型肺泡細胞之間 ，數量較Ⅰ型肺泡細胞多 ，但覆蓋麵積比Ⅰ型肺泡細胞小 。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔 。細胞核圓形 ，胞質著色淺 、呈泡沫狀 。電鏡下 ，細胞遊離而有少量微絨毛 ，胞質內富含線粒體和溶酶體 ，有較發達的粗麵內質網和高爾基複合體 。核上方有較多的分泌顆粒 ，電子密度高 、大小不等 ，直徑約0.1-1.0μm顆粒內含有平行排列的板層狀結構 ，稱為嗜餓性板層小體 。小體內的主要成分為磷脂 ，以二棕櫚酰為主 ，此外還有糖胺多糖及蛋白質等 。顆粒內物質釋放出來後 ，在肺泡表麵形成一層粘液層 ，稱為表麵活性物質（surfactant） 。表麵活性物質有降低肺泡表麵張力 、穩定肺泡大小的作用 。呼氣時肺泡縮小 ，表麵活性物質密度增加 ，表麵張力降低 ，防止肺泡過度塌陷 ；吸氣時肺泡擴張 ，表麵活性物質密度減小 ，肺泡回縮力加大 ，可防止肺泡過度膨脹 。表麵活性物質的缺乏或變性均可引起肺不張 ，過度通氣可造成表麵活性物質缺乏 ；吸入毒氣可直接破壞表麵活性物質 。Ⅱ型肺泡細胞有分裂 、增殖並分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能 ，故具有修複受損傷上皮的作用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠Ⅱ型肺泡上皮采用彈性蛋白酶灌注消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠Ⅱ型肺泡上皮經SP-C免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

豬生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISAKit   ELISA. 

中文名稱   方法   規格

豬(Dex)ELISAKit   ELISA. 

豬D二聚體(D2D)ELISAKit   ELISA.

豬生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA 試劑盒

Human somal cell derived factor 1 beta (SDF-1 beta /CXCL12) ELISA Kit 人基質細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)試劑盒

GuineapigleukoieneD4,LT-D4ELISAKit 豚鼠白三烯D4(LTD4)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforANG-2(RabbitAngiopoietin2)ELISAKit兔血管生成素2

血液多胺氧化酶(PAO)活性比色法定量試劑盒20次

PorcineEpinephrine/Adrenaline,EPIELISAKit豬(EPI)試劑盒

HA重組甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein

RAP1A (RAS-related protein-1a precursor 0.2mlRAP1A (RAS-related protein-1a precursor) Rap1A抗原

ICAM2重組人 ICAM-2 / CD102 蛋白 (His 標簽) Protein

B3GAT3 Protein Human 重組人 B3GAT3 / GLCATI 蛋白 (His 標簽)

AHSG Protein Human 重組人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 蛋白 (His 標簽)

RAP1A (RAS-related protein-1a precursor 0.2mlRAP1A (RAS-related protein-1a precursor) Rap1A抗原

B3GAT3 Protein Human 重組人 B3GAT3 / GLCATI 蛋白 (His 標簽)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein

AHSG Protein Human 重組人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 蛋白 (His 標簽)

ICAM2重組人 ICAM-2 / CD102 蛋白 (His 標簽) Protein

小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞大鼠磺基轉移酶(SULT1A1)試劑盒  ，英文名 ： SULT1A1 ELISA Kit

Rabbit osteopoin (OPN) ELISA Kit 兔骨橋素(OPN)試劑盒

腦膜奈瑟菌A群(NM-A)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMouseMucin-7,MUC7ELISAKit小鼠粘蛋白/粘液素7

體液胱(cystine)含量比色法定量試劑盒20次

ELISAKit28SrRNP人28S抗核糖體抗體

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。