老哥俱乐部

细胞简介：

兔棕色脂肪分离自棕色脂肪组织；动物体内存在棕色和白色两种脂肪
，白色脂肪堆积在皮下，负责储存多余热量
；棕色脂肪负责分解引发肥胖的白色脂肪
，将后者转化成二氧化碳
、水和热量，本身不储存热量。棕色脂肪组织呈棕色，其特点是组织中有丰富的毛细血管，脂肪细胞内散着许多小脂滴，线粒体大而丰富，核圆形，位于细胞中央，这种脂肪细胞也称为多泡脂肪细胞
。棕色脂肪组织在成年动物极少，新生儿及冬眠动物较多，在新生儿主要分布在肩胛间区、腋窝及颈后部等处。棕色脂肪组织仅在婴儿时期发挥作用，它们堆积在新生儿肩胛处，帮助维持体温。随着年龄增长

，棕色脂肪会逐渐消失。终
，动物体内只残存少量棕色脂肪细胞，分布于颈部和锁骨
。脂肪细胞分为白色脂肪细胞和褐色（棕色）脂肪细胞
，常呈白色，在婴幼儿期大量增殖，到青春期数量达到
，此后数量一般不再增加
。细胞内含有大量富含脂肪的小泡，称为脂质泡，富含光面内质网。此外，还有一种褐色脂肪细胞

，在动物体内主要存在于肩胛骨间
、颈背部
、腋窝

、纵隔及肾脏周围，含有高度团缩的褐色脂肪，作用是将脂质分解产热，调节体内脂质比例
。

方法简介：

实验室分离的兔棕色脂肪采用胶原酶-联合消化法获得前脂肪细胞
，经成脂诱导培养基诱导培养制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔棕色脂肪经油红O染色检测，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件
：PLL(0.1mg/ml)

培养基：基础培养基，含FBS、EGF、Insulin、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：梭形、多角形

传代特性：属于终末分化细胞
；属于不增殖细胞群

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2
，5%

兔棕色脂肪体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二

、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品

：

大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NAADP)检测试剂盒 ，英文名： NAADP ELISA Kit

Mouse thrombin receptor () ELISA Kit 小鼠受体()检测试剂盒

MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 小鼠红细胞生成素受体(EPOR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanCompleme4,C4ELISAKit人补体蛋白4

细胞CASEINKINASE1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitLebtospira大鼠钩端IgG

IgG2a重组小鼠 IgG2a-Fc 蛋白 Protein

胞外超氧化物歧化酶(SOD3)重组蛋白 Recombinant Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)

AKR1C2重组人 AKR1C2 蛋白 Protein

CPLX2 Protein Human 重组人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白

CD59 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白

alpha Adaptin/AP1 衔接蛋白α抗原 0.5mgalpha Adaptin/AP1 衔接蛋白α抗原

CPLX2 Protein Human 重组人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白

IL6ST重组小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白 Protein

BST1 Protein Rat 重组大鼠 CD157 / BST1 蛋白 (Fc 标签)

C1D重组人 C1D 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠热休克因子1(HSF1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human brain naiuretic peptide / brain naiuretic peptide (BNP) ELISA Kit 人脑素/脑尿肽(BNP)检测试剂盒

HumanEsogen-inducedproteinpS2ELISAKit 人雌激素诱导蛋白PS2检测试剂盒 96T/48T 进口分装

guineapigIerferonγ,IFN-γ检测试剂盒豚鼠γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒20次

MouseCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit小鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔棕色脂肪细胞小鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠内脏脂肪特异性丝酸蛋白酶抑制剂(vaspin)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠内皮脂肪酶(EL)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠内皮抑素(ES)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基


、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。