細胞簡介 ：

兔子宮內膜基質分離自子宮組織 ；子宮是孕育胎兒的器官 ，位於盆腔中部 ，膀胱與直腸之間 ，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化 。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶 、盆膈 、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持 ，這些結構受損或鬆弛時 ，可以引起子宮脫垂 。子宮內膜即黏膜 ，由上皮（屬單層柱狀上皮 ，有分泌細胞和纖毛細胞二種）和固有膜（由結締組織構成 ，其內有大量的星形細胞 ，稱為基質細胞）組成 ，子宮內膜可分為淺表的功能膜和深部的基底層 ，功能層較厚 ，約占內膜厚度的4/5 ；基底層較薄較致密 ，約占1/5 ，功能層可剝脫 ，而基底層不可剝脫 。子宮內膜上皮細胞主要功能 ：①子宮內膜亦稱子宮黏膜 ，是指構成哺乳類子宮內壁的一層 ；②子宮內膜對動情素和孕激素都起反應 ，因此可隨著性周期（發情周期 、月經周期）發生顯著的變化 。子宮內膜與胚胎附植密切相關 ，在生殖生理的研究中占重要地位 。在胚胎與母體“對話"的過程中 ，子宮內膜上皮細胞充當了極其重要的角色 。子宮內膜構成雌性哺乳動物子宮壁的內層 ，位於子宮腔麵 ，在動物生殖生理活動中占有重要地位 。子宮和子宮內膜是維持雌性動物生理功能和生育能力的重要器官 ，子宮內膜的再生修複是子宮的重要生理功能 。體外培養的子宮內膜上皮細胞對於研究其生理功能 、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔子宮內膜基質采用膠原酶消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔子宮內膜基質經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔子宮內膜基質體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠配對框基因6(PAX6)檢測試劑盒  ，英文名： PAX6 ELISA Kit

Mouse thromboxane B2 (TXB2) ELISA Kit 小鼠血栓素B2(TXB2)檢測試劑盒

RatGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 大鼠γ氨基(GABA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGP210(MouseAi-glucoprotein210)ELISAKit小鼠抗核膜糖蛋白210抗體

細胞丁酰酯酶活性化學發光法定量檢測試劑盒20次

RatThyroid-Peroxidase,TPOELISAKit大鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)檢測試劑盒規格：96T/48T

TGFBR2重組食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

MICA(MHC class I polypeptide-related sequence A 0.5mgMICA(MHC class I polypeptide-related sequence A) 一種細胞應激分子抗原

CDH17重組人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白 Protein

COX5B Protein Human 重組人 COX5B 蛋白

CD3D Protein Mouse 重組小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 標簽)

MICA(MHC class I polypeptide-related sequence A 0.5mgMICA(MHC class I polypeptide-related sequence A) 一種細胞應激分子抗原

COX5B Protein Human 重組人 COX5B 蛋白

TGFBR2重組食蟹猴 TGFBR2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD3D Protein Mouse 重組小鼠 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc 標簽)

CDH17重組人 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 蛋白 Protein

小鼠乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒 96T/48T

Human visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 人內脂素/內髒脂肪素(visfatin)檢測試劑盒

HumanSurfactaProteinD,SP-DELISAKit 人表麵活性蛋白D(SP-D)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapighepatocytegrowthfactor,HGF檢測試劑盒豚鼠肝細胞生長因子(HGF)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

MouseCeruloplasmin,CP/CERELISAKit小鼠銅藍蛋白(CP/CER)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔子宮內膜基質細胞小鼠敏感蛋白-1   英文名稱 ：   thrombospondin 1   規格 ：      英文縮寫 ：   TSP-1

小鼠血栓調節蛋白   英文名稱 ：   thrombomodulin   規格 ：      英文縮寫 ：   TM

小鼠TH糖蛋白   英文名稱 ：   Mouse Tamm Horsfall Protein   規格 ：      英文縮寫 ：   THP

小鼠抗酸性0酸酶5   英文名稱 ：   Mouse Tarate Resista Acid Phosphatase 5   規格 ：      英文縮寫 ：   AP 5

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。