老哥俱乐部

细胞简介
：

兔阴道壁成纤维分离自阴道组织；阴道位于膀胱、尿道和直肠之间，是一个富有弹性的管状器官
。它在人类生殖过程中具有多种生理功能
，是连接子宫与外阴的通道，是排出月经血
、娩出婴儿的必经之路
，也是一个重要的性交器官
。阴道壁按组织学由外到内分三层，即黏膜层、肌层和外膜。1）黏膜层由上皮和固有膜组成。上皮较厚，为复层鳞状上皮，从基底层到表层由基底层、旁基底层、中间层和表层组成。没有角化层。阴道粘膜的基底层呈细波纹状起伏。2）肌层由平滑肌组织构成

，肌束排列不规则，纵行和环形互相交错。肌束间有较多的结缔组织和弹性纤维
。阴道外口有环形的横纹肌称括约肌
。3）外膜层为纤维膜

，由结缔组织构成
，内含丰富的弹性纤维、静脉丛、淋巴管和神经
。大鼠阴道壁成纤维细胞主要分离自外膜层，成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

方法简介

：

实验室分离的兔阴道壁成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的tu阴道壁成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性
：可传3-5代左右；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2，5%

兔阴道壁成纤维体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

兔子表皮生长因子(EGF)ELISA 试剂盒

Human vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 人血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)检测试剂盒

HumanVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit 人内脏脂肪特异性丝蛋白酶抑制剂(vaspin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanEsadiol,E2检测试剂盒人雌二醇(E2)检测试剂盒规格：96T/48T

组织SPHK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit人孤腓肽(OFQ/N)检测试剂盒规格：96T/48T

G-250快速无毒型蛋白质染色试剂 100ml

Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein 0.5mgTsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗原

NCR3重组人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

IL23 Protein Human 重组人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

IL1RAP Protein Human 重组人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 标签)

Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein 0.5mgTsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗原

IL23 Protein Human 重组人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

G-250快速无毒型蛋白质染色试剂 100ml

IL1RAP Protein Human 重组人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 标签)

NCR3重组人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

豚鼠钩端IgG(Lebtospira)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)检测试剂盒

humanβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit 人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCyclicguanosinemonophosphate,cGMP检测试剂盒人环0酸鸟苷(cGMP)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织FGFR3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Humanprimaryhepaticcarcinoma,PHCELISAKit人肝癌抗原(PHC)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔阴道壁成纤维细胞人桩蛋白检测试剂盒   人桩蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   人桩蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）

，产品别名：人桩蛋白试剂盒
、人桩蛋白检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

人乙脱氢酶检测试剂盒   人乙脱氢酶试剂盒   规格型号：96T/48T   人乙脱氢酶试剂盒
，规格型号
：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名
：人乙脱氢酶试剂盒
、人乙脱氢酶检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月
。

人血红蛋白检测试剂盒   人血红蛋白试剂盒   规格型号
：96T/48T   人血红蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名

：人血红蛋白试剂盒、人血红蛋白检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

人心肌锚蛋白重复域1检测试剂盒   人心肌锚蛋白重复域1试剂盒   规格型号：96T/48T   人心肌锚蛋白重复域1试剂盒
，规格型号

：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：人心肌锚蛋白重复域1试剂盒、人心肌锚蛋白重复域1 检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。