老哥俱乐部

细胞简介：

兔胰腺星状分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成
，腺泡分泌胰液
，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原
、脂肪酶、等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质
、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成

：α细胞、β细胞
、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素
，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖

；γ细胞分泌，以旁分泌的方式抑制α
、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动
、胰液分泌和胆囊收缩。纤维化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星状细胞（PSC）是胰腺纤维化的主要效应细胞，PSC分离和成功培养是体外研究胰腺纤维化的重要前提
。未活性化的PSC胞浆中富含维A脂滴，并表达Desmin蛋白，活化后的PSC则表达α-平滑肌肌动蛋白（alpha-SMA）。PSC具有静息态与激活态两种
，并分别具有特异的标志物。静息状态PSC胞质内富含的脂滴可以被油红O染成红色
，阳性表达Desmin。激活状态PSC阳性表达alpha-SMA。油红O染色发现
，原代分离的细胞培养6d，胞浆中仍可见明显的脂滴
，传代后
，橙红色的脂滴颗粒显著减少甚至消失
。免疫细胞化学染色显示，细胞接种24h仍然表达Desmin，48h后Desmin基本不再表达
。培养48h后绝大多数细胞开始表达alpha-SMA
，随着培养时间的增长和传代次数的增加，细胞表达alpha-SMA，而不再表达Desmin，说明细胞活化。提示PSC接种24h后即启动了激活过程
，至培养第6d大多数细胞激活
，传代后细胞处于高度激活状态
。原代胰腺星状细胞可作为慢性胰腺炎新药的细胞筛选模型，目前研究发现：胰腺受损时，在各种刺激因子作用下使胰腺星状细胞活化
，导致细胞形态、功能发生变化
，促使基质增生、胶原蛋白的大量生成及不规则沉积。

方法简介
：

公司实验室分离的兔胰腺星状采用胶原酶消化法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的兔胰腺星状经α-SMA、Desmin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等

。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3-5代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%
；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

鸭病毒性肠病毒试剂盒   鸭病毒性肠病毒试剂盒   规格型号

：96T/48T   鸭病毒性肠病毒试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：鸭病毒性肠病毒试剂盒、鸭病毒性肠病毒eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

鸭白介素6试剂盒   鸭白介素6试剂盒   规格型号：96T/48T   鸭白介素6试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：鸭白介素6试剂盒鸭白介素6试剂盒

、鸭白介素6eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

鸭白介素4试剂盒   鸭白介素4试剂盒   规格型号
：96T/48T   鸭白介素4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源

：试剂盒（进口分装）
，产品别名：鸭白介素4试剂盒、鸭白介素4eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人晶体蛋白β试剂盒   人晶体蛋白β试剂盒   规格型号
：96T/48T   人晶体蛋白β试剂盒
，规格型号

：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：人晶体蛋白β试剂盒
、人晶体蛋白βeisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠总(TC)试剂盒 96T/48T

Human natural deoxyribonucleic acid aibody (n-DNA-Ab) ELISA Kit 人抗天然脱氧核糖核酸抗体(n-DNA-Ab)试剂盒

HumanPyridinoline,PYDELISAKit 人酚(PYD)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACAST-DIV(HumanaoaibodiesagainsttheC-terminaldomainIV)ELISAKit人抗钙蛋白酶抑素抗体

药品糖精(saccharin)含量高效液相色谱法定量试剂盒20次

Mousep53/tumorprotein,p53/TP53ELISAKit小鼠p53(p53)试剂盒规格：96T/48T

REG3A重组大鼠 REG3A 蛋白 (Fc 标签) Protein

FGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8 0.5mgFGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8) 成纤维细胞生长因子-8/纤维母细胞生长因子-8 (抗原)

PDE2A重组人 PDE2A / CGS-PDE 蛋白 (aa 215-900, His 标签) Protein

CASP7 Protein Human 重组人 CASP7 / caspase 7 / MCH3 蛋白

EPCAM Protein Mouse 重组小鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

FGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8 0.5mgFGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8) 成纤维细胞生长因子-8/纤维母细胞生长因子-8 (抗原)

CASP7 Protein Human 重组人 CASP7 / caspase 7 / MCH3 蛋白

REG3A重组大鼠 REG3A 蛋白 (Fc 标签) Protein

EPCAM Protein Mouse 重组小鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

PDE2A重组人 PDE2A / CGS-PDE 蛋白 (aa 215-900, His 标签) Protein

兔胰腺星状细胞大鼠肌酐(Cr)试剂盒 ，英文名： Cr ELISA Kit

Rabbit 8- isoprostane (8-epi-PGF2 a) ELISA Kit 兔8-异构前列腺素(8-epi-PGF2α)试剂盒

对虾皮下和造血器官坏死病毒(HHNV)核酸试剂盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMousesmallnuclearribonucleoprotein,sNP/SmELISAKit小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗体

体液钙离子浓度比色法定量试剂盒20次

ELISAKit6-keto-PGF1a人6同前列腺素F1a

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。