老哥俱乐部

实验报告：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

兔脊髓神经少突胶质分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护
；是源自脑的中枢神经系统延伸部分
。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息
。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经
，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路
，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的

。神经胶质细胞，简称胶质细胞
，是神经组织中除神经元以外的另一大类细胞
，也有突起
，但无树突和轴突之分，广泛分布于中枢和周围神经系统。在哺乳类动物中
，神经胶质细胞与神经元的细胞数量比例约为10：1。在中枢神经系统（CNS）中的神经胶质细胞主要有星形胶质细胞
、少突胶质细胞（与前者合称为大胶质细胞）和小胶质细胞等
。传统认为胶质细胞属于结缔组织
，其作用仅是连接和支持各种神经成分
，其实神经胶质还起着分配营养物质
、参与修复和吞噬的作用，在形态、化学特征和胚胎起源上都不同于普通结缔组织
。

方法简介：

实验室分离的兔脊髓神经少突胶质采用胶原酶-联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔脊髓神经少突胶质经GC(Galactocerebroside)免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV
、支原体

、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含B-27 Supplement
、PDGF-AA
、bFGF
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性：不增殖；不传代

消化液
：0.25%

培养条件
：气相
：空气，95%
；CO2，5%

兔脊髓神经少突胶质体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠CD80分子(CD80/B7-1)检测试剂盒 ，英文名： CD80/B7-1 ELISA Kit

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CBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2 0.5mgCBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2) 成骨特异性转录因子(多肽)

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FGFRL1重组小鼠 FGFRL1 / FGFR5 蛋白 Protein

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小鼠T细胞活化连接蛋白(LAT)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat iggering receptor expressed on myeloid cells -1 (EM-1) ELISA Kit 大鼠髓系细胞触发受体-1(EM-1)检测试剂盒

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HumanClusterofdiffereiation30,CD30检测试剂盒人CD30分子(CD30)检测试剂盒规格：96T/48T

组蛋白脱乙酰化酶10(HDAC10)活性比色法定量检测试剂盒20次

humahofamilyGTPase1,RND1ELISAKit人Rho家族GTP酶1(RND1)检测试剂盒规格

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兔干扰素-β(rabbit IFN-β)   作用
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：      进口分装

兔干扰素-r(rabbit IFN-r)   作用：   ELISA   规格：      进口分装