老哥俱乐部

细胞简介：

兔脊髓神经干分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构
，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息
。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面
，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区

，主要由神经细胞构成
；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成
；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官
。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢
。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节
，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的
。神经干细胞是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。需要强调的是
，在脑脊髓等所有神经组织中
，不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同，分布也不同
。神经干细胞作为干细胞的一种，它具有其它所有干细胞的基本特征
：具有自我维持和自我更新能力，具有多种分化潜能，具有分化为本系统大部分类型细胞的能力，这种自我更新和分化潜能可以维持相当长的时间甚至终生，对损伤和疾病具有反应能力。神经干细胞在疾病、损伤状态下具有增殖、迁移
，并向神经细胞
、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力，已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点
，体外建立稳定的神经干细胞培养模型是其基础和临床应用的前提。神经干细胞在培养3-4d后
，可形成神经球
，神经球在培养基中呈悬浮生长。

方法简介：

实验室分离的兔脊髓神经干采用消化后差速贴壁
，结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来，总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔脊髓神经干经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基
：含B-27 Supplement
、EGF、bFGF、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：悬浮

细胞形态：球形

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%
，Accutase

培养条件
：气相
：空气，95%；CO2，5%

兔脊髓神经干体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素2(IL-2)检测试剂盒
，英文名
： IL-2 ELISA Kit

Mouse 6 galactose sulfatase (Gal-6S) ELISA Kit 小鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)检测试剂盒

ELISA 小鼠可溶性白介素-2受体(mouse sIL-2R)  进口分装

CLIAKitforIL-6(HumanIerleukin6)ELISAKIT人白介素6

通用型肌酐(CREATININE)酶连续反应比色法定量检测试剂盒50次

ELISAKitICA大鼠胰岛细胞抗体

NTRK2重组狗 TrkB / NTRK2 蛋白 (Fc 标签) Protein

Nestin 巢蛋白(神经上皮干细胞蛋白 0.5mgNestin 巢蛋白(神经上皮干细胞蛋白)(抗原)

SEMA6A重组人 Semaphorin 6A / SEMA6A 蛋白 Protein

IFNA8 Protein Human 重组人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白

IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白

Nestin 巢蛋白(神经上皮干细胞蛋白 0.5mgNestin 巢蛋白(神经上皮干细胞蛋白)(抗原)

IFNA8 Protein Human 重组人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白

NTRK2重组狗 TrkB / NTRK2 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL12B Protein Mouse 重组小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白

SEMA6A重组人 Semaphorin 6A / SEMA6A 蛋白 Protein

小鼠17羟孕酮(17-OHP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 大鼠纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)检测试剂盒

HumanIsoprenalineHydrochloride,iso-HydELISAKit 人异(iso-Hyd)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCoisol检测试剂盒人(Coisol)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织C-KIT激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanproteinkinaseB,PKBELISAKit人蛋白激酶B(PKB)检测试剂盒规格：96T/48T

兔脊髓神经干细胞突触核蛋白   英文名称
：   Human α Synucleinα   规格

：      英文缩写：   α-SYN

血清铁蛋白   英文名称：   ferritin in serum   规格：      英文缩写：   SF

肺表面活性物质相关蛋白A   英文名称：   Pulmonary surfacta associated protein type A   规格：      英文缩写：   SP-A

β-谷甾醇   英文名称
：   β Sitosterol   规格：      英文缩写：   β Sitosterol

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。