老哥俱乐部

细胞简介：

兔骨内膜间充质干分离自股骨

、胫骨；骨内膜是一层致密结缔组织膜
，覆盖在骨的表面（关节面除外）
，新鲜骨内膜呈粉红色，含有丰富的血管、神经和成骨细胞。此外，附着于骨的肌腱、韧带于附着部位都与骨内膜编织在一起。因而骨内膜与骨质结合甚为牢固。骨内膜富含血管、神经，通过骨质的滋养孔分布于骨质和骨髓。骨内膜分内


、外两层，外层主要是粗大的胶原纤维束，部分纤维穿入骨质
，使骨内膜固定于骨面
；内层疏松
，含成骨细胞和破骨细胞（分别具有产生新骨质和改建骨的功能）
。骨髓腔和骨松质的网眼也衬着一层菲薄的结缔组织膜
，叫做骨膜。骨内膜的内层和骨膜有分化成骨细胞和破骨细胞的能力，以形成新骨质和破坏

、改造已生成的骨质
，所以对骨的发生、生长、修复等具有重要意义。骨内膜间充质干细胞是一种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨
、肌组织、皮肤
、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞
。骨内膜间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中
，受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响
。

方法简介

：

公司实验室分离的兔骨内膜间充质干采用冲洗骨髓、消化骨内膜、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔骨内膜间充质干经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右

；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2
，5%

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠CD4分子(CD4)检测试剂盒 
，英文名： CD4 ELISA Kit

Mouse ulasensitive thyroid stimulating hormone (U-TSH) ELISA Kit 小鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)检测试剂盒

MouseiactParathormone,i-PTHELISAKit 小鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforhumanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit人高灵敏度促甲状腺激素

通用型细胞周期同步(SYNCHRONY)细胞流式分析试剂盒20次

ELISAKitADRA1A大鼠能a1A受体

SEMA5A重组小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白 Protein

防御素β113(DEFβ113)重组蛋白 Recombinant Defensin Beta 113 (DEFb113)

TSPAN8重组人 TSPAN8 / Tetraspanin 8 / TM4SF3 蛋白 (Fc 标签) Protein

CLIC4 Protein Human 重组人 CLIC4 蛋白

FCGRT & B2M Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白

70kDa热休克蛋白1样蛋白(HSPA1L)重组蛋白 Recombinant Heat Shock 70kDa Protein 1 Like Protein (HSPA1L)

CLIC4 Protein Human 重组人 CLIC4 蛋白

EGF重组小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 标签) Protein

ACE2 Protein Rat 重组大鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白

MKI67重组人 MKI67 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠瘦素(LEP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ankyrin (ankyrin) ELISA Kit 人锚蛋白(ankyrin)检测试剂盒

Humandecay-acceleratingactivity,DAFELISAKit 人衰变加速因子(DAF/CD55)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

E2ELISA鱼雌二醇规格：96T/48T

增强型HRP-AEC底物显色试剂盒10次

MouseCyclin-D2ELISAKit小鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)检测试剂盒规格：96T/48T

兔骨内膜间充质干细胞小鼠上腺髓质素检测试剂盒   小鼠上腺髓质素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠上腺髓质素试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：小鼠上腺髓质素试剂盒、小鼠上腺髓质素检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠上腺素检测试剂盒   小鼠上腺素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠上腺素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名
：小鼠上腺素试剂盒、小鼠上腺素检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月
。

小鼠上腺素能a1A受体检测试剂盒   小鼠上腺素能a1A受体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠上腺素能a1A受体试剂盒
，规格型号

：96T/48T

，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠上腺素能a1A受体试剂盒、小鼠上腺素能a1A受体检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月
。

小鼠神经营养因子检测试剂盒   小鼠神经营养因子试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠神经营养因子试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠神经营养因子试剂盒

、小鼠神经营养因子检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决


。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。