老哥俱乐部

细胞简介

：

兔骨骼肌分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种
，约占全身重量的40%
。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附
。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌
，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动
。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌
、菱形肌
、三角肌、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支
，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）
。明带染色较浅
，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线
。明带中间，有一条较暗的线称为Z线
。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞
，细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹

，核很多
，且都位于细胞膜下方
，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形
、三角形或扇形，核卵圆形
、居中
；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富
，有分枝状突起
，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介
：

公司实验室分离的兔骨骼肌采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔骨骼肌经α-Sarcometric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次

，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠8-羟基脱氧8-OHdG鸟苷酸(mouse 8-OHdG)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠食欲素A(mouse Orexin A)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠氧化低密度脂蛋白(mouse OxLDL)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠抑瘤素mouse  M(mouse OSM)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA 试剂盒

Human aquaporin 3 (AQP-3) ELISA Kit 人水通道蛋白3(AQP-3)试剂盒

HumancoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit 人Ⅱ(FⅡ)试剂盒 进口分装

HumanApelin36,AP12试剂盒人Apelin36(AP36)试剂盒

植物氧化应激活性氧(ROS)荧光测定试剂盒(单线态氧气)20次

Humaotalbileacide,TBAELISAKit人总胆汁酸(TBA)试剂盒

CD40LG重组小鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白  Protein

成纤维细胞生长因子23(FGF23)重组蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 23 (FGF23)

PTPN12重组人 PTPN12 蛋白 Protein

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His & AVI 标签), Biotinylated

PDCD1LG2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白

成纤维细胞生长因子23(FGF23)重组蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 23 (FGF23)

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His & AVI 标签), Biotinylated

CD40LG重组小鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白  Protein

PDCD1LG2 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白

PTPN12重组人 PTPN12 蛋白 Protein

兔骨骼肌细胞大鼠酶Ⅸ(CA9)试剂盒 ，英文名： CA9 ELISA Kit

Mouse glycated hemoglobin A1c (GHbA1c) ELISA Kit 小鼠糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)试剂盒

RatCoisolELISAKit 大鼠(Coisol)试剂盒 进口分装

CLIAKitforHLA-G(HumanleukocyteaigenG)ELISAKit人类白细胞抗原G

细胞PKD2激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitC-Peptide大鼠C肽

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。