老哥俱乐部

细胞简介：

兔肠神经嵴干分离自肠组织；神经嵴干细胞（neural crest stem cells，NCSC）

，即外周神经系统干细胞，起源于胚胎期的神经管背侧，与中枢神经系统干细胞在形态学上有着显著不同，NCSC可表达低亲和力神经营养因子受体p75NTR而不能分化出少突胶质细胞，而中枢神经系统干细胞与之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多种组织
，如神经元、神经胶质、黑色素细胞、内分泌细胞、平滑肌、骨骼肌及骨等
，其中可特异性分化出肠神经系统中神经元和神经胶质的NCSC，被称为肠神经嵴干细胞（gut neural crest stem cells
，GNCSC）。

方法简介：

实验室分离的兔肠神经嵴干采用-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔肠神经嵴干经Nestin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基：含B-27 Supplement
、EGF

、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：悬浮

细胞形态：球形

传代特性：可传1-3代左右；3代以内状态佳

消化液
：0.25%

培养条件
：气相：空气
，95%
；CO2，5%

兔肠神经嵴干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠转化生长因子β受体Ⅰ(TGFβR1)检测试剂盒 ，英文名： TGFβR1 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgA (ACA-IgA) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)检测试剂盒

MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit 小鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanlatemembraneprotein-1,LMP-1ELISAKit人潜伏膜蛋白1

微管蛋白(tubulin)结合分子(bindingmolecules)检测试剂盒20次

αFodrinIgG/IgA大鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA

SERPINA1A重组小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 Protein

碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)重组蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2)

CETN2重组人 CETN2 / Centrin 2 蛋白 Protein

HIF1A Protein Human 重组人 HIF-1 alpha / HIF1A 蛋白

CD4 Protein Ferret 重组雪貂 CD4 / Leu-3 蛋白

碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)重组蛋白 Recombinant Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2)

HIF1A Protein Human 重组人 HIF-1 alpha / HIF1A 蛋白

SERPINA1A重组小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 Protein

CD4 Protein Ferret 重组雪貂 CD4 / Leu-3 蛋白

CETN2重组人 CETN2 / Centrin 2 蛋白 Protein

小鼠p53(p53)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat glycogen phosphorylase isoenzyme BB (GP-BB) ELISA Kit 大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒

HumanAndrostenedione,ASDELISAKit 人雄(ASD)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumancoagulationfactorⅩ,FⅩ检测试剂盒人Ⅹ(FⅩ)检测试剂盒规格：96T/48T

组蛋白转甲基酶活性检测试剂盒(H3-K4)20次

HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit人复制蛋白A(RPA-70)检测试剂盒规格：96T/48T

兔肠神经嵴干细胞兔型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒   兔型纤溶酶原激活物受体试剂盒   规格型号：96T/48T   兔型纤溶酶原激活物受体试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名
：兔型纤溶酶原激活物受体试剂盒、兔型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

兔型纤溶酶原激活物检测试剂盒   兔型纤溶酶原激活物试剂盒   规格型号

：96T/48T   兔型纤溶酶原激活物试剂盒
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：检测试剂盒（进口分装），产品别名：兔型纤溶酶原激活物试剂盒、兔型纤溶酶原激活物检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

兔淋巴细胞功能相关抗原3检测试剂盒   兔淋巴细胞功能相关抗原3试剂盒   规格型号：96T/48T   兔淋巴细胞功能相关抗原3试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）
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兔粒细胞集落刺激因子检测试剂盒   兔粒细胞集落刺激因子试剂盒   规格型号

：96T/48T   兔粒细胞集落刺激因子试剂盒
，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：兔粒细胞集落刺激因子试剂盒、兔粒细胞集落刺激因子检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。