老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人胰腺上皮分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成
，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道
。胰液中含有、原、脂肪酶。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞
、β细胞
、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖
；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽

，抑制胃肠运动
、胰液分泌和胆囊收缩。胰腺干细胞在发育上被认为分离自内胚层胰腺上皮，在随后的胰腺发育过程中，胰腺干细胞分化为胰岛细胞（α、β
、δ
、PP细胞）
、导管上皮细胞以及腺泡细胞。胰腺组织中还存在大量的间充质来源的细胞，包括成纤维细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞以及星形细胞，其中以成纤维细胞占主要部分。要离体分离培养获得胰腺上皮细胞就要排除间充质来源的细胞，尤其是成纤维细胞。目前常用的去除成纤维细胞方法有机械刮除法、消化以及胶原酶消化法等，胰腺上皮细胞的病变与急慢性胰腺炎的发生具有重大意义。

方法简介：

公司实验室分离的人胰腺上皮采用胶原酶分次消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人胰腺上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS

、生长添加剂

、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA 试剂盒

Human iggering receptor expressed on myeloid cells -1 (EM-1) ELISA Kit 人髓系细胞触发受体-1(EM-1)检测试剂盒

HumanChlamydiaachomatis,CTELISAKit 人沙眼衣原体抗体(CT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanargininevasopressin,AVP检测试剂盒人精加压素(AVP)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物源性食品花生(pean)试剂盒20次

Humahymus-leukemiaaigen,TLaELISAKit人白血病抗原(TLa)检测试剂盒规格：96T/48T

CD33重组小鼠 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

CD4分子(CD4)重组蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 4 (CD4)

MSLN重组人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (aa 296-580, Fc 标签) Protein

IRAK4 Protein Human 重组人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

FAS Protein Rat 重组大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白

CD4分子(CD4)重组蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 4 (CD4)

IRAK4 Protein Human 重组人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白

CD33重组小鼠 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

FAS Protein Rat 重组大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白

MSLN重组人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (aa 296-580, Fc 标签) Protein

豚鼠白介素22(IL-22)检测试剂盒 ，英文名： IL-22 ELISA Kit

Human ubiquitin protein (Ub) ELISA Kit 人泛素蛋白(Ub)检测试剂盒

RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit 兔子白介素1β(IL-1β)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-EP(RabbitBeta-Endorphin)ELISAKit兔子β内啡肽

细菌样品二维电泳裂解液用于细菌蛋白二维电泳

RabbitGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit兔糖化血红蛋白A1c(A1c)检测试剂盒规格
：96T/48T

人胰腺上皮细胞人粘蛋白5AC(MUC5AC)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human MUC5AC (Mucin 5 Subtype AC) ELISA Kit

人粘蛋白5B(MUC5B)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human MUC5B (Mucin 5 Subtype B) ELISA Kit

人粘蛋白7(MUC7)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human MUC7 (Mucin 7) ELISA Kit

人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human MEC/CCL28 (Mucosae Associated Epithelia Chemokine) ELISA Kit