老哥俱乐部

细胞简介：

人胰腺癌组织源星状分离自患有胰腺癌病人的胰腺癌组织；胰腺癌是一种恶性程 度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤
，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌
。其发病率和死亡率近年来明显上升
。5年生存率<1%
，是预后差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的确诊率不高
，手术死亡率较高，而很低。胰腺癌 的病因尚不十分清楚。其发生与吸烟
、饮酒、高脂肪和高蛋白饮食、过量饮用咖啡、环境污染及遗传因素有关；近年来的调查报告发现糖尿病人群中胰腺癌的发 病率明显高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人与胰腺癌的发病存在一定关系，发现慢性胰腺炎病人发生胰腺癌的比例明显增高；另外还有许多因素与此 病的发生有一定关系
，如职业、环境、地理等
。随着医学技术的进步
，大部分癌症的生存率都在提高，例如乳腺癌，结直肠癌等肿瘤，近几十年来
，生存率得到 了大幅度的提升

。但胰腺癌的生存率一直停滞不前，缺乏有效的治疗方法，的死亡率使其
，近年来胰腺癌微环境的研究引起了诸多学者的重视
。胰腺癌微环境构成复杂
，其中，胰腺星状细胞是胰腺癌微环境中重要的间质细胞之一，在胰腺癌细胞生长
、迁移、侵袭、血管生成、免疫逃逸

、转移及化疗耐药中发挥重要的作用
。因此针对胰腺星状细胞和胰腺癌细胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的预后。胰腺星状细胞(pancreaticstellate cells , PSC)是一种胰腺特异性间质细胞，多在胰腺组织内血管和导管周围聚集，环绕在腺泡的基底部位
，正常静比状态下只占胰腺细胞的4%左右

，细胞质中含有丰富的脂滴，以表达胶质纤丝酸性蛋白质(glial filament acidic protein , GFAP )
、结合蛋白(Desmin)为特征。在胰腺组织损伤、应激等条件下PSC被激活
，成为一种肌成纤维细胞
，胞质中富含的脂滴消失
，以表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin , α-SMA)为标志，能大量合成细胞外基质(extracellular matrix , ECM)和分泌多种细胞因子。胰腺癌微环境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的发生发展中起着重要作用。PSC通过诱导胰腺癌细胞(pancreatic cancercells , PCC)上皮一间质转变(epithelial-mesenchymaltransition , EMT)促进胰腺癌侵袭和转移侵袭和转移是肿瘤细胞脱离原发肿瘤灶到达靶器官的一个多步骤过程，众多研究表明EMT与胰腺癌的侵袭转移密切相关
。EMT主要的特征是上皮细胞特征丢失同时伴间质细胞特征获得，如E一钙茹蛋白(E-cadherin)表达下降，波形蛋白(Vimentin)表达上调。karnevi等研究发现，PSC与PCC共培养后能够诱导PCC上皮性细胞标志(E-cadherin , β-catenin)丢失，促进间质性细胞标志(Vimentin,Snai-1）获得，表明PSC在PCC的EMT形成过程中发挥了重要的作用
。PSC参与胰腺癌进展的各个环节，而PSC活化是PSC发挥功能的重要部分。因此，如能抑制PSC活化或控制PSC细胞功能将为胰腺癌综合治疗提供潜在的治疗策略。因此，随着针对抑制PSC活化或其功能的研究的深入，有望从胰腺癌微环境角度切实提高胰腺癌的综合治疗效果。

方法简介
：

实验室分离的人胰腺癌组织源星状采用胶原酶消化法结合密度梯度离心法制备而来制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人胰腺癌组织源星状经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件：

培养基
：含FBS
、EGF
、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%
；CO2，5%

人胰腺癌组织源星状体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶


，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二


、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品

：

大鼠热休克蛋白β2(HSPβ2)检测试剂盒 
，英文名： HSPβ2 ELISA Kit

Mouse vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 小鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)检测试剂盒

RatTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit 大鼠组织因子途径抑制物(TFPI)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGSTs(HumanglathioneS-ansferases)ELISAKit人S转移酶

细胞超氧化物阴离子比色法定量检测试剂盒20次

Rattumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AILR3ELISAKit大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(AIL-R3)检测试剂盒规格：96T/48T

PTN重组人 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 Protein

Tanis/SELS (Selenoprotein S 0.5mgTanis/SELS (Selenoprotein S)又称SELS 症负调控因子蛋白(抗原)

SERPINI1重组人 SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白 Protein

CLEC2B Protein Human 重组人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 标签)

TNFRSF10B Protein Human 重组人 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白 (His & Fc 标签)

Tanis/SELS (Selenoprotein S 0.5mgTanis/SELS (Selenoprotein S)又称SELS 症负调控因子蛋白(抗原)

CLEC2B Protein Human 重组人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 标签)

PTN重组人 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 Protein

TNFRSF10B Protein Human 重组人 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白 (His & Fc 标签)

SERPINI1重组人 SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白 Protein

小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human helical peptide (Helical Peptide) ELISA Kit 人螺旋肽(Helical Peptide)检测试剂盒

Humanhydroxylysine,HylELISAKit 人羟赖(Hyl)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

DuckImmunoglobulinE,IgE检测试剂盒鸭免疫球蛋白E(IgE)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞组蛋白H3-K9甲基化荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MousedipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)检测试剂盒规格：96T/48T

人胰腺癌组织源星状细胞小鼠生长激素释放多肽(GHRP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠生长激素（GH）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠生长调节致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠损伤分子1(Kim-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。