老哥俱乐部

细胞简介：

人牙龈上皮分离自牙龈组织

；牙龈是附着在牙颈和牙槽突部分的粘膜组织，呈粉红色
、有光泽、质坚韧。牙龈边缘称为龈缘，正常呈月芽形。龈缘与牙颈之间的小沟称龈沟。两邻牙之间的牙龈突起称龈乳突。也叫齿龈，通称牙床；是指包住齿颈的黏膜组织，粉红色
，内有很多血管和神经。牙龈上皮长期被认为是抵御口腔中持续存在的细菌的被动免疫屏障，随着对牙周致病菌的不断认识，发现牙龈上皮不仅仅是抵御微生物的物理屏障，上皮细胞还可以分泌抗菌多肽，参与先天性免疫。牙龈上皮作为牙周组织的道屏障，在抵御牙周炎细菌入侵的过程中发挥了重要作用，建立正常牙龈上皮细胞体外培养体系

，将为各种牙龈上皮相关的研究提供稳定的实验模型。

方法简介：

实验室分离的人牙龈上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人牙龈上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌

、酵母和真菌等
。

培养信息

：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS

、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：上皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2，5%

人牙龈上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)检测试剂盒 
，英文名
： IGFBP3 ELISA Kit

Mouse visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 小鼠内脏脂肪特异性丝蛋白酶抑制剂(vaspin)检测试剂盒

MouseVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKIT 小鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanCyclicAMPresponseelemebindingprotein,CREBELISAKit人cAMP反应元件结合蛋白

细胞AX1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitALP-B大鼠骨特异性碱性0酸酶B

IL20RB重组大鼠 IL20RB 蛋白 Protein

GPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7 0.5mgGPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7) 0脂酰基醇蛋白聚糖-3(多肽)

CD28重组人 CD28 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签) Protein

CLEC10A Protein Human 重组人 CLEC10A / MGL1 / CD301 蛋白 (Fc 标签)

EPHB1 Protein Mouse 重组小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白 (His & GST 标签)

GPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7 0.5mgGPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7) 0脂酰基醇蛋白聚糖-3(多肽)

CLEC10A Protein Human 重组人 CLEC10A / MGL1 / CD301 蛋白 (Fc 标签)

IL20RB重组大鼠 IL20RB 蛋白 Protein

EPHB1 Protein Mouse 重组小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白 (His & GST 标签)

CD28重组人 CD28 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签) Protein

小鼠丝酸/苏酸蛋酸酶(STK)检测试剂盒 96T/48T

Rat myosin (Myosin) ELISA Kit 大鼠肌球蛋白(Myosin)检测试剂盒

Humanneuraminidase,NAELISAKit 人神经酶(NA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Duckai-prothrombinsaibodies,aPT1/aPT2检测试剂盒鸭抗凝血素抗体(aPT1/aPT2)检测试剂盒规格
：96T/48T

载玻片细胞样品蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

Mousedopamine,DAELISAKit小鼠多巴胺(DA)检测试剂盒规格
：96T/48T

人牙龈上皮细胞小鼠结合蛋白4(RBP-4)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠结合蛋白(RBP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠生长因子(GH)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠(SS)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。