老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织


，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人肾皮质上皮分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液
，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物
，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖
、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子

、等
，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能
，生成肾素、促红细胞生成素
、活性3、前列腺素、激肽等
，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。

方法简介
：

公司实验室分离的人肾皮质上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人肾皮质上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上

，且不含有HIV-1
、HBV、HCV

、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气

，95%
；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠内脏脂肪特异性丝酸蛋白酶抑制因子(Vaspin)检测试剂盒 
，英文名： Vaspin ELISA Kit

Monkey ierferon gamma (IFN- gamma) ELISA Kit 猴γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒

Ratlipoproteinα,Lp-αELISAKit 大鼠脂蛋白α(Lp-α)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGlyCAM-1(Humanglycosylation-dependecelladhesionmolecule-1)ELISAKit人糖基化依赖的细胞黏附分子

细胞非蛋白/游离巯基含量荧光定量检测试剂盒20次

RatSomalcellderivedfactor1a,SDF-1aELISAKit大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)检测试剂盒规格：96T/48T

CD48重组大鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签) Protein

ER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受体(抗原 0.5mgER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受体(抗原)

CD4重组人 CD4 / LEU3 蛋白 (aa 1-208, His 标签) Protein

IgG1 Protein Human 重组人 IgG1 Fc 蛋白

CD99 Protein Mouse 重组小鼠 CD99 / PILR1 蛋白 (Fc 标签)

ER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受体(抗原 0.5mgER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受体(抗原)

IgG1 Protein Human 重组人 IgG1 Fc 蛋白

CD48重组大鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD99 Protein Mouse 重组小鼠 CD99 / PILR1 蛋白 (Fc 标签)

CD4重组人 CD4 / LEU3 蛋白 (aa 1-208, His 标签) Protein

豚鼠胰岛素样生长因子2(IGF2)检测试剂盒 
，英文名： IGF2 ELISA Kit

Human Chlamydia pneumoniae aibody (Cpn-Ab) ELISA Kit 人肺衣原体抗体(Cpn-Ab)检测试剂盒

rabbitmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISAKit 兔子基质金属蛋白酶4(MMP-4)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBcl3(humanB-cellleukemia/lymphoma3)ELISAKit人B细胞淋巴瘤因子3

纤维蛋白溶酶(PLASMIN)活性比色法定量检测试剂盒20次

RabbitCoisolELISAKit兔子(Coisol)检测试剂盒规格：96T/48T

人肾皮质上皮细胞双向调节蛋白   英文名称

：   Amphiregulin   规格：      英文缩写
：   AR

固   英文名称：   Aldosterone   规格

：      英文缩写：   Aldosterone

白细胞活化黏附因子   英文名称：   Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule   规格：      英文缩写：   ALCAM

膜联蛋白5   英文名称：   Annexin 5   规格

：      英文缩写：   ANXA-5