老哥俱乐部

细胞简介
：

人肾动脉平滑肌分离自肾动脉组织
；肾动脉的分支为叶间动脉
，穿行于肾柱内，上行至皮质与髓质交界处
，形成与肾表面平行的弓状动脉
。小叶间动脉向被膜发出毛细血管，并向周围的肾小体发出入球小动脉
，进入肾小囊后形成球形的毛细血管网，再汇集成出球小动脉，出肾小体。直小动脉分支形成毛细血管网，再汇合成直小静脉，入弓状静脉、叶间静脉
，后汇合成肾静脉经肾门出肾，注入下腔静脉
。肾动脉既是肾的营养血管，又是肾的机能血管
，与肾泌尿机能密切相关。肾动脉在肾实质内形成两个毛细血管网：肾小球毛细血管网，血压较高，利于血浆滤过形成原尿

；球后毛细血管网，血压较低
，利于肾小管的重吸收。肾动脉平滑肌细胞是肾动脉的重要结构细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用
。肾动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展
，细胞形态大小不一，呈梭形
、不规则形、三角形或扇形
，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合

，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介
：

公司实验室分离的人肾动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人肾动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品
：

小鼠β内啡肽受体(β-EPR)ELISA 试剂盒

Human vitamin B6 (VB6) ELISA Kit 人B6(VB6)检测试剂盒

HumanCollagenaseTypeIIELISAKit 人胶原酶II(CollagenaseII)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanc-fos检测试剂盒人c-fos检测试剂盒规格

：96T/48T

转基因玉米MON863品系基因定量检测试剂盒20次

Humanserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit人丝/苏蛋酸酶(STK)检测试剂盒规格：96T/48T

B18R重组牛痘病毒 B18R / B19R 蛋白 Protein

TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 0.5mgTIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金属蛋白酶组织抑制因子-2(抗原)

TIGIT重组人 TIGIT / VSTM3 蛋白 Protein

IL20RA Protein Human 重组人 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (ECD, Fc 标签)

MAPK14 Protein Human 重组人 p38 alpha / MAPK14 蛋白

TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 0.5mgTIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金属蛋白酶组织抑制因子-2(抗原)

IL20RA Protein Human 重组人 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (ECD, Fc 标签)

B18R重组牛痘病毒 B18R / B19R 蛋白 Protein

MAPK14 Protein Human 重组人 p38 alpha / MAPK14 蛋白

TIGIT重组人 TIGIT / VSTM3 蛋白 Protein

豚鼠环0酸鸟苷(cGMP)检测试剂盒 ，英文名： cGMP ELISA Kit

Human hepatitis D virus IgG (HDV IgG) ELISA Kit 人丁型肝IgG(HDV IgG)检测试剂盒

MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 猴载脂蛋白B100(apo-B100)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforbFGF-4ELISAKit大鼠碱性成纤维细胞生长因子4

细菌色酶比色法定量检测试剂盒20次

RabbitIerleukin17,IL-17ELISAKit兔白介素17(IL-17)检测试剂盒规格：96T/48T

人肾动脉平滑肌细胞人组胺(HIS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人抵抗素(Resistin)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

人骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人骨钙素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。