老哥俱乐部

细胞简介：

人乳腺癌血管周分离自乳腺癌组织；女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%
。乳腺并不是维持机体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命
；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落
，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身
，形成转移，危及生命。目前，乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤

。周细胞（pericyte）又称Rouget细胞和壁细胞
，是一种包围全身毛细血管和静脉中内皮细胞的细胞
，可以收缩
。周细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。此外
，周细胞还具有调控毛细血管血流量
、细胞碎屑清除和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用
，其多功能性是目前研究的热点之一，所以对血管周细胞的生物学特征、标记物

、细胞功能等的研究都为相关研究提供基础资料。周细胞产生手指状的外延以调控毛细血管的血流量
。周细胞和内皮细胞之间共同拥有一个基膜，基膜上有多种细胞连接
，包括多种整合素、神经钙黏素
、纤连蛋白以及接合素。它还参与毛细血管直径的双向调控；毛细血管受损时
，周细胞还可增殖
，分化为内皮细胞和成纤维细胞。

方法简介
：

公司实验室分离的人乳腺癌血管周采用胶原酶-联合消化法及不锈钢网筛过滤法结合密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人乳腺癌血管周经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠SHC转化蛋白1(SHC1)检测试剂盒 ，英文名： SHC1 ELISA Kit

Mouse apoptosis inducing factor (AIF) ELISA Kit 小鼠凋亡诱导因子(AIF)检测试剂盒

ELISA 小鼠催乳素(mouse PRL)  进口分装

CLIAKitforIFN-Gamma(HumanIerferonGamma)ELISAKit人γ干扰素

通用型禽鼻气管鸟杆菌(Ornithobacteriumrhinoacheale;O)试剂盒20次

ELISAKitVD3大鼠3

CD53重组食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, His 标签) Protein

LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原 0.5mgLPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原

FCGR2A重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 标签), Biotinylated Protein

GSTK1 Protein Human 重组人 GSTK1 蛋白

IL2 Protein Mouse 重组小鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原 0.5mgLPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原

GSTK1 Protein Human 重组人 GSTK1 蛋白

CD53重组食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, His 标签) Protein

IL2 Protein Mouse 重组小鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

FCGR2A重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, His & AVI 标签), Biotinylated Protein

小鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 人3(VD3)检测试剂盒

HumanAi-OvaryAibody,AOAbELISAKit 人抗卵巢抗体(AOAb)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancholecystokinin,CCK检测试剂盒人胆囊收缩素/肠促肽(CCK)检测试剂盒规格
：96T/48T

紫外可见光分析20样本

HumanSecretinELISAKit人促胰液素/胰泌素(Secretin)检测试剂盒规格：96T/48T

人乳腺癌血管周细胞兔抑瘤素M(OSM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔血管生成素2(ANG-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名称   方法   规格

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。