老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

人脐带血单核分离自脐带血；脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液。近十几年的研究发现
，脐带血中含有可以重建造血和免疫系统的造血干细胞，可用于造血干细胞移植

，因此
，脐带血已成为造血干细胞的重要来源。脐带血中含有大量的干细胞，干细胞是生命的种子，它会分化成机体的各种细胞
，结出各种不同的果实——血液细胞、神经细胞、骨骼细胞等
。干细胞是具有自我更新
、高度增殖和多项分化潜能的细胞群体
；这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量，又可进一步分化为各种组织细胞
，从而在组织修复等方面发挥积极作用。血液中的单核细胞来源于骨髓干细胞分化出的髓样干细胞

，是机体防御系统的一个重要组成部分
。单核细胞能吞噬异物产生抗体
，在机体损伤治愈
、抗御病原的入侵和对疾病的免疫方面起着重要的作用。机体发生炎症或其他疾病都可引起单核细胞总数百分比发生变化
，因此，检查单核细胞计数成为辅助诊断的一种重要方法

。

方法简介：

公司实验室分离的人脐带血单核采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人脐带血单核经CD14免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 半贴壁半悬浮

细胞形态 圆形、巨噬细胞样

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%
；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠蛋白激酶Cγ(PKCγ)检测试剂盒 ，英文名： PKCγ ELISA Kit

N- acetyl - seryl - aspayl -- lysyl - proline (AcSDKP 人N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯(AcSDKP

RatIerleukin15,IL-15ELISAKIT 大鼠白介素15(IL-15)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforCXCR1(HumanCXC-chemokinereceptor1)ELISAKit人CXC趋化因子受体1

细胞色素P450亚酶CYP3A1(BROD)活性荧光定量检测试剂盒20次

RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit大鼠凋亡相关因子配体(FASL)检测试剂盒规格：96T/48T

BACE1重组人 BACE1 / ASP2 蛋白 (Fc 标签) Protein

角蛋白2(KRT2)重组蛋白 Recombinant Keratin 2 (KRT2)

GAL重组人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 标签) Protein

CHL1 Protein Human 重组人 CHL-1 蛋白

HA Protein H5N8 重组甲型流感 H5N8 (A/turkey/Ireland/1378/1983) 血凝素 (Hemagglutinin) 蛋白 His 标签)

角蛋白2(KRT2)重组蛋白 Recombinant Keratin 2 (KRT2)

CHL1 Protein Human 重组人 CHL-1 蛋白

BACE1重组人 BACE1 / ASP2 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein H5N8 重组甲型流感 H5N8 (A/turkey/Ireland/1378/1983) 血凝素 (Hemagglutinin) 蛋白 His 标签)

GAL重组人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠糖化白蛋白(GA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ELISA Kit 大鼠环0酸腺苷(cAMP)检测试剂盒

Humahymus-leukemiaaigen,TLaELISAKit 人白血病抗原(TLa)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChikenPullorumDiseaes,PD检测试剂盒鸡白痢抗体检测(PD)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒-LEPTIN10/20次

Mouseeosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit小鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)检测试剂盒规格
：96T/48T

人脐带血单核细胞小鼠髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠丝酸/苏酸蛋酸酶（STK）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠水通道蛋白5(AQP-5)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装